發(fā)布時間：2022-02-10 12:48

　　異種核移植可能成為保護(hù)高度瀕危動物,建立治療性克隆非人靈長類動物模型和核質(zhì)互作關(guān)系研究動物模型的一種有效方法�？梢员苊馊祟愔委熜钥寺⊙芯恐械膫惱�、法律和臨床上的實(shí)驗(yàn)限制。本研究利用核移植技術(shù),將食蟹猴耳部皮膚成纖維細(xì)胞融于去核豬卵母細(xì)胞中,經(jīng)融合和活化后,體外培養(yǎng),并進(jìn)行了相關(guān)的研究。1.應(yīng)用組織塊培養(yǎng)法從年齡4歲的雄性食蟹猴耳皮膚進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng),成功建立了耳緣組織成纖維細(xì)胞系。單個細(xì)胞均為典型梭形細(xì)胞,抗波形蛋白免疫熒光染色顯示為陽性,抗角形蛋白免疫熒光染色為陰性,分離到的細(xì)胞為耳部成纖維細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)分析了培養(yǎng)細(xì)胞的微管蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示培養(yǎng)細(xì)胞具有良好的細(xì)胞骨架系統(tǒng),從另一側(cè)面反映了培養(yǎng)條件比較適合于食蟹猴耳成纖維細(xì)胞的生長。繪制的細(xì)胞生長曲線呈“S”型,細(xì)胞生長經(jīng)歷了潛伏期、指數(shù)生長期和停滯期,符合體外細(xì)胞生長規(guī)律。該成纖維細(xì)胞染色體數(shù)2n=42,并分析了5、10、30代染色體數(shù),2n所站的比率分別為90.16%、86.20%、83.07%。用含10%FBS和10%DMSO的DMEM為冷凍液,解凍后細(xì)胞活率經(jīng)FDA/PI染色檢測,細(xì)胞活率都在93%以上,傳代后細(xì)胞生... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：173 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    引言
    1 哺乳動物細(xì)胞核移植的研究進(jìn)展
        1.1 早期的核移植研究
        1.2 哺乳動物胚胎細(xì)胞核移植
        1.3 哺乳動物體細(xì)胞核移植
        1.4 哺乳動物異種核移植研究
    2 哺乳動物核移植的研究方法
        2.1 受核細(xì)胞的去核
            2.1.1 盲吸去核法
            2.1.2 活體熒光染色去核
            2.1.3 化學(xué)輔助去核
            2.1.4 應(yīng)用偏光顯微鏡(Pol-Scope)去核
            2.1.5 半卵切割去核
        2.2 供核細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.3 核移植重構(gòu)胚胎的構(gòu)建
        2.4 核移植胚胎的體外培養(yǎng)及胚胎移植
        2.5 提高核移植效率的途徑
            2.5.1 連續(xù)核移植
            2.5.2 四倍體補(bǔ)償方法
            2.5.3 細(xì)胞抽提物處理
            2.5.4 供體細(xì)胞進(jìn)行移植前藥物處理
    3. 哺乳動物體細(xì)胞核移植的機(jī)理研究
        3.1 發(fā)育相關(guān)基因、基因簇的研究
        3.2 核重建(NUCLEAR REMODELING)
        3.3 體細(xì)胞供體核重新程序化
        3.4 細(xì)胞周期調(diào)控
        3.5 基因印跡(IMPRINTING)
        3.6 端粒和端粒酶
    4. 動物核移植技術(shù)的應(yīng)用
        4.1 轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)
        4.2 治療性克隆
        4.3 其它方面的應(yīng)用
    5 參考文獻(xiàn)
第二章 食蟹猴耳皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及其生物學(xué)特性研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 討論
    4. 小結(jié)
    5 參考文獻(xiàn)
第三章 食蟹猴耳皮膚成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期調(diào)控
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 討論
    4. 小結(jié)
    5. 參考文獻(xiàn)
    6. 圖版
第四章 食蟹猴耳部皮膚成纖維細(xì)胞表觀遺傳學(xué)修飾
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料與方法
    2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    3. 結(jié)果
    4. 討論
    5. 小結(jié)
    6. 參考文獻(xiàn)
    7. 圖版
第五章 食蟹猴-豬異種重構(gòu)胚胎體外發(fā)育以及線粒體命運(yùn)的初步研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 討論
    4. 小結(jié)
    5. 參考文獻(xiàn)
    6. 圖版
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作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3618918