異種核移植可能成為保護高度瀕危動物,建立治療性克隆非人靈長類動物模型和核質互作關系研究動物模型的一種有效方法。可以避免人類治療性克隆研究中的倫理、法律和臨床上的實驗限制。本研究利用核移植技術,將食蟹猴耳部皮膚成纖維細胞融于去核豬卵母細胞中,經融合和活化后,體外培養(yǎng),并進行了相關的研究。1.應用組織塊培養(yǎng)法從年齡4歲的雄性食蟹猴耳皮膚進行原代和傳代培養(yǎng),成功建立了耳緣組織成纖維細胞系。單個細胞均為典型梭形細胞,抗波形蛋白免疫熒光染色顯示為陽性,抗角形蛋白免疫熒光染色為陰性,分離到的細胞為耳部成纖維細胞,免疫細胞化學分析了培養(yǎng)細胞的微管蛋白表達情況,結果顯示培養(yǎng)細胞具有良好的細胞骨架系統,從另一側面反映了培養(yǎng)條件比較適合于食蟹猴耳成纖維細胞的生長。繪制的細胞生長曲線呈“S”型,細胞生長經歷了潛伏期、指數生長期和停滯期,符合體外細胞生長規(guī)律。該成纖維細胞染色體數2n=42,并分析了5、10、30代染色體數,2n所站的比率分別為90.16%、86.20%、83.07%。用含10%FBS和10%DMSO的DMEM為冷凍液,解凍后細胞活率經FDA/PI染色檢測,細胞活率都在93%以上,傳代后細胞生... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū)211工程院校

【文章頁數】：173 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 文獻綜述
    引言
    1 哺乳動物細胞核移植的研究進展
        1.1 早期的核移植研究
        1.2 哺乳動物胚胎細胞核移植
        1.3 哺乳動物體細胞核移植
        1.4 哺乳動物異種核移植研究
    2 哺乳動物核移植的研究方法
        2.1 受核細胞的去核
            2.1.1 盲吸去核法
            2.1.2 活體熒光染色去核
            2.1.3 化學輔助去核
            2.1.4 應用偏光顯微鏡(Pol-Scope)去核
            2.1.5 半卵切割去核
        2.2 供核細胞的準備
        2.3 核移植重構胚胎的構建
        2.4 核移植胚胎的體外培養(yǎng)及胚胎移植
        2.5 提高核移植效率的途徑
            2.5.1 連續(xù)核移植
            2.5.2 四倍體補償方法
            2.5.3 細胞抽提物處理
            2.5.4 供體細胞進行移植前藥物處理
    3. 哺乳動物體細胞核移植的機理研究
        3.1 發(fā)育相關基因、基因簇的研究
        3.2 核重建(NUCLEAR REMODELING)
        3.3 體細胞供體核重新程序化
        3.4 細胞周期調控
        3.5 基因印跡(IMPRINTING)
        3.6 端粒和端粒酶
    4. 動物核移植技術的應用
        4.1 轉基因動物生產
        4.2 治療性克隆
        4.3 其它方面的應用
    5 參考文獻
第二章 食蟹猴耳皮膚成纖維細胞的培養(yǎng)及其生物學特性研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料與方法
    2. 結果
    3. 討論
    4. 小結
    5 參考文獻
第三章 食蟹猴耳皮膚成纖維細胞細胞周期調控
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料與方法
    2. 結果
    3. 討論
    4. 小結
    5. 參考文獻
    6. 圖版
第四章 食蟹猴耳部皮膚成纖維細胞表觀遺傳學修飾
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料與方法
    2. 實驗設計
    3. 結果
    4. 討論
    5. 小結
    6. 參考文獻
    7. 圖版
第五章 食蟹猴-豬異種重構胚胎體外發(fā)育以及線粒體命運的初步研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料與方法
    2. 結果
    3. 討論
    4. 小結
    5. 參考文獻
    6. 圖版
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致謝
作者簡介


【參考文獻】：
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本文編號：3618918