牛支原體（Mycoplasmabovis，M.bovis）是引起犢牛肺炎、關節(jié)炎和奶牛乳房炎的主要病原體，近年來，由牛支原體感染引起的相關疾病已蔓延至全世界，2010年以來，新疆北疆部分地區(qū)規(guī)模化牛場犢牛陸續(xù)出現嚴重的肺炎與關節(jié)炎，造成大批犢牛死亡，后經實驗室診斷確定病原體為牛支原體。目前，國內尚無預防該病的商品化疫苗供生產應用，而抗生素治療常存在盲目用藥，療效不確定等情況。為了解決上述問題本試驗著重開展了以下研究：1.將分離并鑒定得到的牛支原體新疆分離菌株進行擴大培養(yǎng)制備滅活菌懸液，然后分別與弗氏完全佐劑、白油佐劑、氫氧化鋁佐劑、蜂膠佐劑配合，制成滅活疫苗免疫小鼠，通過測定血清中的抗體水平來篩選免疫效果較好的疫苗佐劑。結果表明白油佐劑組的免疫增強效果最佳，產生的抗體水平最高，并且高抗體水平持續(xù)時間較長，可以作為牛支原體滅活疫苗的較理想佐劑。2.在常用牛心湯培養(yǎng)基基礎上進行了改良，將配方中原有牛心湯進行了2倍濃縮并加入了DMEM和牛肺消化液，利用活菌計數法、菌體蛋白測定法、OD值測定法對牛支原體新疆分離株在改良后的液體培養(yǎng)基中不同培養(yǎng)階段的生長滴度即顏色變化單位（CCU）、菌體蛋白量及... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校

【文章頁數】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞
目錄
引言
第一章 文獻綜述牛支原體研究概況
    1 支原體研究概況
        1.1 支原體培養(yǎng)特性
        1.2 支原體形態(tài)特征
        1.3 支原體的致病性
        1.4 支原體的抗原結構
        1.5 支原體的抵抗力
    2 主要畜禽支原體
        2.1 牛肺疫
        2.2 豬喘氣病
        2.3 雞慢性呼吸道疾病
        2.4 山羊傳染性胸膜肺炎
    3 牛支原體研究進展
        3.1 流行病學
        3.2 病原學
        3.3 致病性
            3.3.1 毒力因子
            3.3.2 牛支原體誘導的免疫反應
        3.4 臨床癥狀與病理變化
            3.4.1 臨床癥狀
            3.4.2 病理變化
        3.5 鑒別診斷
            3.5.1 病原分離鑒定
            3.5.2 血清學診斷
            3.5.3 基因診斷
        3.6 感染模型
        3.7 疫病防控
            3.7.1 加強檢疫監(jiān)管
            3.7.2 嚴格封鎖和隔離
            3.7.3 認真做好消毒滅源
            3.7.4 加強飼養(yǎng)管理
        3.8 疫苗研制
        3.9 結語
第二章 試驗研究
    試驗一 牛支原體滅活疫苗免疫小鼠最佳免疫劑量的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 設備
            1.3 免疫方法
            1.4 IHA檢測血清血凝效價
                1.4.1 抗原制備
                1.4.2 綿羊紅細胞采集
                1.4.3 紅細胞的醛化、鞣酸化和抗原致敏
                1.4.4 IHA操作步驟與判定標準
        2 結果與分析
        3 討論
        4 小結
    試驗二 四種佐劑對牛支原體滅活疫苗免疫小鼠抗體水平的研究
        1. 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗菌株及試驗動物
                1.1.2 培養(yǎng)基
                1.1.3 設備
                1.1.4 佐劑及其制備
                1.1.5 ELISA檢測主要試劑
        2 方法
            2.1 抗原制備
            2.2 牛支原體滅活佐劑疫苗的制備
            2.3 免疫方法及血樣采集
            2.4 ELISA檢測血清抗體效價
                2.4.1 包被抗原的制備
                2.4.2 陰性血清制備
                2.4.3 陽性血清制備
                2.4.4 酶標板預處理
                2.4.5 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋倍數測定
                2.4.6 酶標二抗最佳工作濃度的確定
                2.4.7 臨界值的確定
                2.4.8 抗體效價檢測
        3 結果與分析
            3.1 疫苗穩(wěn)定性及無菌檢驗
            3.2 疫苗安全性檢驗
            3.3 抗原、血清最佳工作濃度
            3.4 酶標二抗最佳工作濃度
            3.5 臨界值的確定
            3.6 疫苗抗體水平檢測
        4 討論
            4.1 不同佐劑疫苗免疫部位的局部反應
            4.2 不同佐劑疫苗抗體水平的差異
        5 小結
    試驗三 牛支原體常用牛心湯培養(yǎng)基的改良極其培養(yǎng)效果研究
        1 材料和方法
            1.1 菌株
            1.2 儀器
            1.3 培養(yǎng)基
            1.4 菌種的復蘇
            1.5 活菌計數CCU的測定
            1.6 菌體蛋白測定
            1.7 OD值的測定
            1.8 平板菌落計數CFU的測定
        2 結果與分析
            2.1 活菌計數CCU結果
            2.2 菌體蛋白測定結果
            2.3 OD值測定結果
            2.4 平板菌落計數CFU的測定結果
        3 討論
        4 小結
    試驗四 八種抗菌藥物對牛支原體的體外最小抑菌濃度研究
        1. 材料與方法
            1.1 藥品試劑
            1.2 培養(yǎng)基
            1.3 儀器
            1.4 菌種
            1.5 顏色變化單位（CCU）的測定
            1.6 最小抑菌濃度（MIC）的測定
        2 結果與分析
            2.1 顏色變化單位（CCU）的測定
            2.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定
        3 討論
        4 小結
第三章 論文結論與創(chuàng)新點
    論文結論
    創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡介
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
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[10]山羊支原體性肺炎研究進展[J]. 宋維發(fā).  中國畜禽種業(yè). 2009(06)

博士論文
[1]牛傳染性胸膜肺炎診斷技術與分子流行病學研究[D]. 辛九慶.吉林農業(yè)大學 2007

碩士論文
[1]豬肺炎支原體MY-99株的培養(yǎng)特性、致病性及免疫原性研究[D]. 張莉.四川農業(yè)大學 2008
[2]綿羊肺炎支原體的分離鑒定與敏感藥物試驗的研究[D]. 白永平.四川農業(yè)大學 2007
[3]綿羊肺炎支原體山東株的分離鑒定和標準株外膜蛋白特性研究[D]. 王建昌.山東農業(yè)大學 2007



本文編號：3618710