為探究綿羊肺炎支原體（MO）是否對人體造成潛在影響,本研究以人肺泡Ⅱ型上皮細胞為細胞模型,將MO Y98株熒光染色后感染人肺泡Ⅱ型上皮細胞,于激光共聚焦顯微鏡下可見MO存在于細胞中;分別利用CCK-8及CellTiter-Lumi^TM試劑盒檢測細胞的增殖及活力,結(jié)果顯示MO對人肺泡Ⅱ型上皮細胞的增殖及活性均無顯著影響;掃描電鏡檢測細胞形態(tài),結(jié)果顯示肺泡上皮細胞偽足明顯增多;基因芯片分析篩選出3個mRNA及5個lncRNA,熒光定量PCR驗證后確定SCNN1G、LOX、ST6GALNAC1及l(fā)ncRNA RP11-29G8.3-001在MO感染后的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生顯著變化;熒光定量PCR檢測肺泡上皮細胞中IL-1β、TNF-α、IFN、IRF7等炎癥因子,結(jié)果顯示這些因子基因的轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化;采用將lncRNA RP11-29G8.3-001過表達的方法對其功能進行研究,結(jié)果顯示少量lncRNA RP11-29G8.3-001表達增高不會調(diào)控細胞免疫相關(guān)基因的表達。本研究結(jié)果表明MO并不降低人肺泡Ⅱ型上皮細胞的增殖及活性,且MO對人肺泡Ⅱ型上皮細胞炎癥因子的表達無顯... 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

MO感染人肺泡II型上皮細胞模型的建立

為了觀察MO感染人肺泡II型上皮細胞后的形態(tài)變化，本實驗采用掃描電鏡進行觀察，結(jié)果顯示：人肺泡II型上皮細胞在感染MO后會伸出很多偽足（圖3），推測MO刺激細胞后伸出的偽足可能是MO進入細胞質(zhì)基質(zhì)的原因。2.4 MO感染人肺泡II型上皮細胞中相關(guān)基因表達及轉(zhuǎn)錄水平的檢測

以往研究顯示，肺炎支原體可以通過對宿主細胞的黏附、膜融合、營養(yǎng)剝奪、侵入、毒力因子等作用直接損傷宿主細胞[7]。但本實驗通過CCK-8及細胞ATP水平檢測等手段，發(fā)現(xiàn)MO感染人肺泡II型上皮細胞48 h后，感染組及對照組細胞數(shù)量及細胞活性并無明顯改變，推測MO感染可能不會引起人肺泡II型上皮細胞增殖能力降低甚至死亡。利用DIO熒光染色的MO感染人肺泡II型上皮細胞，發(fā)現(xiàn)MO可以進入細胞質(zhì)基質(zhì)中，而且掃描電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)MO感染會促進人肺泡II型上皮細胞伸出偽足，推測MO可能利用胞飲進入細胞。而支原體和細胞膜成分相似，這可能也是MO進入細胞的一個途徑。圖5 lnc RNA RP11-29G8.3-001在人肺泡II型上皮細胞中的表達量變化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組甲型流感病毒基質(zhì)蛋白1和2通過ERK信號因子誘導小鼠氣管上皮細胞產(chǎn)生IFN-γ[J]. 祝潔,朱顏鑫,曹慧軍,羅紅,蘭露莎,江滟.  病毒學報. 2018(05)
[2]高氧環(huán)境下ROS對腸上皮細胞表達TNF-α和HIF-1-α的影響[J]. 趙敏,唐詩邈,劉冬妍.  實用藥物與臨床. 2017(02)
[3]從湖羊肺臟中分離綿羊肺炎支原體的鑒定[J]. 李媛,陶岳,阿依吐拉·肉孜,高玉龍,尹訓南,李新萍,張孝恩,王硯范,辛九慶.  中國預防獸醫(yī)學報. 2006(04)



本文編號：3615864