兔出血癥（Rabbit Hemorrhagic Disease, RHD）是由兔出血癥病毒（Rabbit Hemorrhagic Disease Virus, RHDV）引起的兔的一種急性、敗血性、高度接觸性傳染病,以致死性和全身實質(zhì)器官出血為主要特征。RHDV是杯狀病毒科成員,結(jié)構(gòu)簡單,在兔體內(nèi)可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答、細胞免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答,還有極強的誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生的能力。RHDV僅有一個主要結(jié)構(gòu)蛋白VP60, VP60在動物體內(nèi)可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體,與免疫反應(yīng)直接相關(guān),是病毒免疫保護性抗原。VP60衣殼蛋白在體外可自然聚合成不包裹核酸的、與天然RHDV病毒粒子在物理形態(tài)上類似的病毒樣顆粒（virus-like particles, VLPs）、這種病毒樣顆粒具有良好的免疫原性,本身可作免疫佐劑,通過胞吞或胞飲途徑進入抗原提呈細胞,分別誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答。有研究證實這種病毒樣顆粒也可嵌合表達外源基因,或作為疫苗載體。為了探究兔出血癥病毒樣顆粒（RHDV-VLPs）容納外源表位的能力,了解其適宜的外源片段插入位點,探索嵌合VLPs的組裝及其免疫原性,初步評價RHDV... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述：兔出血癥(RHD)的研究進展
    1 兔病毒性出血癥的流行現(xiàn)狀
    2 RHDV的分類
    3 RHDV的形態(tài)特征
    4 RHDV病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能
    5 結(jié)構(gòu)蛋白
        5.1 VP60
        5.2 VP10
    6 非結(jié)構(gòu)蛋白
    7 病毒的理化特性
    8 病毒的血凝性
    9 血清型及進化特點
    10 RHDV致病性
    11 RHDV的培養(yǎng)
    12 RHDV的實驗室檢測
    13 不同載體表達兔出血癥病毒VP60蛋白的研究進展
        13.1 桿狀病毒—昆蟲細胞表達系統(tǒng)
        13.2 大腸桿菌表達系統(tǒng)
        13.3 酵母表達系統(tǒng)
        13.4 植物表達系統(tǒng)
        13.5 腺病毒表達載體
    14 兔出血癥滅活疫苗研究進展
    15 兔出血癥病毒重組病毒疫苗
    16 關(guān)于RHDV疫苗存在的問題與展望
    參考文獻
第二章 ：四種攜帶OVA CD8~+T細胞表位重組穿梭載體的構(gòu)建
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 質(zhì)粒、菌種
        1.2 主要試劑與工具酶
        1.3 核酸序列分析
        1.4 構(gòu)建圖示
        1.5 引物設(shè)計
        1.6 目的基因的擴增
            1.6.1 常規(guī)方法PCR構(gòu)建目的基因G-V-0-579
            1.6.2 重疊區(qū)擴增基因拼接法(SOE法)構(gòu)建目的基因G-v-o-502-510、G-v-o-411-417、G-v-o-302-309
        1.7 T/A克隆與鑒定
        1.8 重組轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建與鑒定
        1.9 穿梭載體Bacmid的構(gòu)建與鑒定
    2 結(jié)果
        2.1 重組穿梭載體Bacmid-V-579的構(gòu)建
        2.2 重組穿梭載體Bacmid-V-502-510、Bacmid-V-411-417、Bacmid-V-302-309的構(gòu)建
    3 討論
        3.1 外源表位插入位置的選擇
        3.2 SOE法操作要點
    參考文獻
    ABSTRACT
第三章 ：四種嵌合蛋白的表達及鑒定
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 質(zhì)粒、菌株與細胞
        1.2 主要試劑與工具酶
        1.3 重組桿狀病毒的構(gòu)建和篩選
        1.4 重組病毒的傳代與初步鑒定
        1.5 表達產(chǎn)物的鑒定
    2 結(jié)果
        2.1 重組蛋白的表達鑒定
        2.2 紅細胞凝集特性鑒定
    3 討論
        3.1 嵌合蛋白的紅細胞凝集特性
        3.2 免疫熒光和western blot
        3.3 RHDV VLPs的構(gòu)建
    參考文獻
    ABSTRACT
第四章 嵌合蛋白的電鏡觀察和免疫原性研究
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 試劑、培養(yǎng)基及重組病毒
        1.2 實驗動物
        1.3 嵌合蛋白的電鏡觀察
        1.4 嵌合蛋白免疫原性的研究
    2 結(jié)果
        2.1 電鏡觀察
        2.2 小鼠血清中VP60抗體水平的檢測
        2.3 小鼠血清中TNF-α的含量檢測
    3 討論
        3.1 電鏡觀察重組蛋白VLPs的形成
        3.2 插入位點與體液免疫應(yīng)答相關(guān)性
        3.3 VLPs與細胞免疫應(yīng)答相關(guān)性
    參考文獻
    ABSTRACT
全文總結(jié)
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]兔出血癥病毒JL株分離鑒定及VP60基因主要抗原表位分析[J]. 金明蘭,侯繼波,鄭其升,魯會軍,韓松,南文龍,金寧一.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2012(06)
[2]兔出血癥病毒衣殼蛋白VP60的原核表達及多克隆抗體制備[J]. 張大鵬,呂寧,符容婕,郭藹光.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(03)
[3]靶向樹突狀細胞的腫瘤疫苗OVA慢病毒載體構(gòu)建及其體外抗腫瘤效應(yīng)[J]. 陳帥,李浩博,李牧,楊耀琴,陶惠紅,趙培林.  同濟大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2012(01)
[4]兔出血癥病毒VP60基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及初步評價[J]. 原冬偉,劉家森,郭東春,司昌德,姜騫,林歡,穆亞芳,劉行波,曲連東.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2011(11)
[5]兔出血癥病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的實驗研究[J]. 原冬偉,劉家森,郭東春,司昌德,姜騫,林歡,穆亞芳,劉行波,曲連東.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2011(08)
[6]兔瘟精制卵黃抗體的實驗室制備及檢驗[J]. 湯少偉.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2010(07)
[7]兔出血癥病毒衣殼蛋白重組腺病毒的構(gòu)建、表達及其免疫原性[J]. 胡波,王芳,秦愛建,范志宇,徐為中,張則斌,薛家賓,何孔旺.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2009(06)
[8]兔出血癥病毒VP60基因在昆蟲細胞中形成病毒樣顆粒及其特性[J]. 劉懷然,劉家森,胡迎東,陳洪巖,單安山,曲連東.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2007(08)
[9]兔出血癥病毒RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 王芳,李超美,楊龍圣,徐為中,張則斌,侯玉峰,陳國強,何孔旺.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2007(03)
[10]一株無血凝性兔出血癥病毒的分離鑒定及其衣殼蛋白VP60基因的克隆和序列分析[J]. 田浪,王紅寧,李建文,廖娟,張夏蘭,周萬蓉,王鴻賓.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2006(10)

碩士論文
[1]兔出血癥病毒衣殼蛋白基因在家蠶中的表達[D]. 王樹坤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012



本文編號：3615800