應(yīng)用轉(zhuǎn)基因雞作為生物反應(yīng)器進(jìn)行功能蛋白的生產(chǎn)具有廣闊的應(yīng)用前景,功能蛋白在蛋中靶向表達(dá)是理想的生產(chǎn)方式。本論文通過構(gòu)建表達(dá)載體生產(chǎn)慢病毒,通過顯微注射導(dǎo)入雞胚制備轉(zhuǎn)基因雞,載體在CMV啟動子控制下,外源蛋白與雞卵黃抗體IgY抗體重鏈恒定區(qū)CH1-4融合,使表達(dá)的外源蛋白通過IgY抗體受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)位到蛋黃,探索轉(zhuǎn)基因雞作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)功能蛋白的可行性,為應(yīng)用轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)醫(yī)用蛋白提供新途徑和思路。利用分子生物學(xué)手段克隆得到雞IgY重鏈恒定區(qū)基因,以EGFP為報(bào)告基因,選取pLOV.CMV.EGFP載體進(jìn)行改造,構(gòu)建真核表達(dá)載體,與包裝質(zhì)粒和包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,生產(chǎn)慢病毒,利用相對熒光定量PCR分析,獲得的慢病毒滴度為7.06×108TU/mL。使用慢病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞系DF1,感染效率較高。分別在雞胚13-14期外周血管和X期胚盤下腔注射1.5μL含有CMV啟動子和EGFP報(bào)告基因的HIV-1型慢病毒溶液,血管注射組孵化率為84.2%,胚盤組孵化率0。通過熒光顯微鏡、RT-PCR、Western Blot等方法在血管注射組雛雞的心臟、肝臟、腦、腎臟、肌胃、胸肌、性腺等組織器官中... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

產(chǎn)蛋母雞的輸卵管[1]

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 錄為雙鏈DNA并可整合入宿主基因組內(nèi)，因此，逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種天然的基因傳遞系統(tǒng)。其原理是先將外源基因連接到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上，制成高滴度病毒顆粒，再感染胚胎或直接將胚胎與能釋放逆轉(zhuǎn)錄病毒的單層細(xì)胞共同》育，可將其所攜帶的外源基因整合到動物基因組中[45]。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體用于制備轉(zhuǎn)基因雞的不足是效率低且外源基因表達(dá)易沉默。一種新型的源于逆轉(zhuǎn)錄病毒的慢病毒（Lentivirus)載體克服了上述缺陷，其能夠廣泛感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞并整合進(jìn)宿主基因組內(nèi)，該載體在轉(zhuǎn)染效率和遺傳穩(wěn)定性上的優(yōu)勢己得到證實(shí)，以及在組織特異性表達(dá)方面的優(yōu)勢己有報(bào)道可作為有效的工具廣泛用于基因-

Fig 3-4 Amplification of the target geneNA Marker； 1,溶1?(酶信號肽和EGFP基因連接產(chǎn)物片段1,人小約765 bp; 2，丨g恒定區(qū)基因，人小約1152 bp。體酶切

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]雞蛋孵化信息的比較研究[D]. 黃鑫.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]鵪鶉胚胎早期PGCs遷移規(guī)律以及性腺發(fā)育的研究[D]. 程旭梅.揚(yáng)州大學(xué) 2009
[3]慢病毒轉(zhuǎn)染雞胚原始生殖細(xì)胞及性腺嵌合體雞的制備[D]. 丁紅梅.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3600229