新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的,在家禽和野生鳥類廣泛傳播的疾病。NDV屬于副粘病毒科（Paramyxovirinae）、禽腮腺炎病毒屬（Avulavirus）,為單股負鏈、不分節(jié)段的RNA病毒。真核翻譯起始因子2α（Eukaryotic Initiation Factor 2α,eIF2α）Ser51位點磷酸化抑制蛋白翻譯起始,是細胞應對各種應激采取的保護策略。例如,細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白積累,病毒感染,氨基酸饑餓等。宿主細胞內(nèi)有四種能引起eIF2α磷酸化的激酶:PKR（double-stranded RNA-dependent protein kinase）,PERK（PKR-like ER kinase）,GCN（general control non-derepressible-2）,HRI（heme-regulated inhibitor）。RNA病毒感染細胞,促使干擾素分泌增加,誘導PKR上調(diào)表達。病毒增值產(chǎn)生的dsRNA激活PKR,進而磷酸化eIF2α,導致蛋白翻譯關(guān)閉。大量... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 新城疫病毒概述
    1.2 真核翻譯起始因子eIF2α
        1.2.1 蛋白翻譯的調(diào)控
        1.2.2 eIF2α 激酶
        1.2.3 PERK
        1.2.4 PKR
        1.2.5 eIF2α 磷酸酶
第二章 NDV對蛋白翻譯效率的影響
    2.1 材料
        2.1.1 毒株和細胞
        2.1.2 抗體和主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 病毒感染
        2.2.2 收集細胞樣品
        2.2.3 Puromycin標記
        2.2.4 SDS-PAGE和Western Blotting分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 NDV感染He La細胞在感染后期導致蛋白翻譯逐步關(guān)閉
        2.3.2 NDV感染DF-1 細胞在感染后期導致蛋白翻譯逐漸關(guān)閉
    2.4 討論
第三章 eIF2α 磷酸激酶PKR/PERK對蛋白翻譯起始的調(diào)控
    3.1 材料
        3.1.1 毒株和細胞
        3.1.2 抗體和主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 病毒感染
        3.2.2 收集細胞樣品
        3.2.3 轉(zhuǎn)染方法
        3.2.4 Puromycin標記
        3.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 NDV感染He La細胞引起eIF2α 磷酸化
        3.3.2 eIF2α 磷酸化影響蛋白翻譯
        3.3.3 NDV感染He La細胞激活eIF2α 上游激酶PKR
        3.3.4 PKR參與eIF2α 的磷酸化
        3.3.5 NDV感染He La細胞引起PERK剪切
        3.3.6 PERK不參與eIF2α 磷酸化
    3.4 討論
第四章 eIF2α 磷酸酶GADD34-PP1對蛋白翻譯起始的影響
    4.1 材料
        4.1.1 毒株和細胞
        4.1.2 抗體和主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 病毒感染
        4.2.2 轉(zhuǎn)染方法
        4.2.3 收集細胞樣品
        4.2.4 Puromycin標記
        4.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
        4.2.6 間接免疫熒光（IFA）檢測
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 NDV感染后期ATF4和GADD34表達上調(diào)
        4.3.2 GADD34上調(diào)表達促進eIF2α 去磷酸化
        4.3.3 NDV感染后期PP1發(fā)生降解
        4.3.4 PP1通過泛素-蛋白酶體途徑降解
        4.3.5 PP1/PP2A抑制劑促進eIF2α 的磷酸化以及抑制蛋白翻譯
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3582286