利用原核表達系統(tǒng)表達并純化獲得藍舌病病毒NS3蛋白。以NS3重組蛋白作為包被抗原,經(jīng)過對包被濃度、樣品稀釋度以及二抗工作濃度和作用時間等一系列條件的優(yōu)化,建立了一種鑒別藍舌病野毒感染的間接ELISA抗體檢測方法。結(jié)果顯示,該方法的檢測靈敏度可達1∶1 280,批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10%,具有良好的重復性。與商業(yè)化的藍舌病試劑盒對比檢測的結(jié)果顯示,兩者的藍舌病陽性樣品符合率為100%,本試驗建立的間接ELISA方法可以區(qū)分藍舌病自然感染和疫苗免疫動物。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學報. 2020,40(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

重組表達載體pCold-NS3雙酶切擴增片段

利用建立的檢測方法對26份已知BTV陰性血清和24份免疫血清進行檢測,計算檢測結(jié)果的平均值 x ˉ = 0.187, 標準方差(s)=0.011,通過公式進一步計算得到陽性閾值PC=0.220,陰性閾值NC=0.209。從而確定檢測方法的判定標準:樣品D450 nm值≥0.220判為陽性,即BTV感染;D450 nm值≤0.209判為陰性,BTV滅活疫苗接種或BTV陰性,可通過商品化的藍舌病抗體檢測試劑盒進一步確定;0.209<D450nm值<0.220判為可疑,需通過再一次試驗進行判定。圖3 Western blot結(jié)果

Western blot結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3575359