宿主因子TMUB1參與流感病毒復(fù)制調(diào)控的機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2022-01-07 21:55
流感病毒屬于正黏病毒科,流感病毒屬。流感病毒是重要的人獸共患性病原,可引起人和多種動(dòng)物感染和發(fā)病。流感病毒的高變異性極易引起流感大流行和跨種間傳播,對人類的生命安全構(gòu)成重大的威脅。因此,抗流感病毒藥物研發(fā)具有重要的意義。通過全基因組siRNA文庫以及報(bào)告性流感病毒可以實(shí)現(xiàn)對參與流感病毒復(fù)制調(diào)控的宿主因子的高通量篩選,為抗流感病毒藥物研發(fā)提供潛在的靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期通過全基因組siRNA文庫以及H5N1 NA-Venus報(bào)告病毒篩選出參與流感病毒復(fù)制調(diào)控的宿主因子。結(jié)合siRNA文庫篩選標(biāo)準(zhǔn),確定了宿主因子跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1（Transmembrane and ubiquitin-like domain-containing 1,TMUB1）。在本研究中,通過蝕斑實(shí)驗(yàn)證實(shí)利用siRNA干擾下調(diào)TMUB1表達(dá)以及利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除TMUB1均可顯著抑制流感病毒復(fù)制。為了探究TMUB1影響流感病毒生活周期的具體階段,本研究通過Western雜交檢測TMUB1對流感病毒感染后不同時(shí)間點(diǎn)病毒蛋白表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)TMUB1敲除后在病毒感染4 h時(shí)可顯著抑制各個(gè)病毒蛋白的表達(dá),...
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】：61 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
下調(diào)TMUB1表達(dá)抑制H5N1NA-Venus報(bào)告病毒的感染率
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 TMUB1 促進(jìn)流感病毒復(fù)制為了驗(yàn)證兩條 TMUB1 siRNA 的干擾效率，首先將兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 轉(zhuǎn)染A549 細(xì)胞，然后利用 Western 雜交檢測 TMUB1 蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調(diào) TMUB1 蛋白表達(dá)水平（圖 2-2a）；利用 qRT-PCR 檢測 TMUB1mRNA 的轉(zhuǎn)錄，結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調(diào) TMUB1 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平（圖 2-2b）。為了排除 TMUB1 siRNA 轉(zhuǎn)染對細(xì)胞的影響，檢驗(yàn)了兩條 TMUB1 siRNA干擾后，對 A549 細(xì)胞活力的影響。結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調(diào) TMUB1表達(dá)后對細(xì)胞活力無顯著影響（圖 2-2c）。
圖 2-2 下調(diào) TMUB1 表達(dá)對細(xì)胞活力無影響Fig. 2-2 Knockdown of TMUB1 has no effect on cell viability（a）Western 雜交顯示兩條 TMUB1 siRNA 下調(diào) TMUB1 蛋白表達(dá)水平；（b）q RT-PCR 表明兩條 TMUB1 siRNA下調(diào) TMUB1 m RNA 轉(zhuǎn)錄水平；（c）下調(diào) TMUB1 表達(dá)對細(xì)胞活力無影響在上述研究基礎(chǔ)上，利用兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 對 A549 細(xì)胞進(jìn)行干擾，分別感染不同亞型的流感病毒 WSN、H5N1、H9N2，在病毒感染后 24 h 和 48 h 收取含有病毒的細(xì)胞上清，進(jìn)行蝕斑滴定。結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調(diào) TMUB1 表達(dá)后，均能顯著抑制不同亞型流感病毒的復(fù)制（圖 2-3）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cloning and Characterization of DULP,a Novel Ubiquitin-Like Molecule from Human Dendritic Cells[J]. Guoyan Liu1,2,Shuxun Liu1,2,Ping Li1,Ling Tang1,Yanmei Han1,Huazhang An1,Jiangyan Li1,Xiankun Dai1,Nan Li1,Xuetao Cao1 and Yizhi Yu1,31Institute of Immunology and State Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2Guoyan Liu and Shuxun Liu contributed equally to this study;. Cellular & Molecular Immunology. 2009(01)
本文編號：3575339
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】：61 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
下調(diào)TMUB1表達(dá)抑制H5N1NA-Venus報(bào)告病毒的感染率
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 TMUB1 促進(jìn)流感病毒復(fù)制為了驗(yàn)證兩條 TMUB1 siRNA 的干擾效率，首先將兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 轉(zhuǎn)染A549 細(xì)胞，然后利用 Western 雜交檢測 TMUB1 蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調(diào) TMUB1 蛋白表達(dá)水平（圖 2-2a）；利用 qRT-PCR 檢測 TMUB1mRNA 的轉(zhuǎn)錄，結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調(diào) TMUB1 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平（圖 2-2b）。為了排除 TMUB1 siRNA 轉(zhuǎn)染對細(xì)胞的影響，檢驗(yàn)了兩條 TMUB1 siRNA干擾后，對 A549 細(xì)胞活力的影響。結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調(diào) TMUB1表達(dá)后對細(xì)胞活力無顯著影響（圖 2-2c）。
圖 2-2 下調(diào) TMUB1 表達(dá)對細(xì)胞活力無影響Fig. 2-2 Knockdown of TMUB1 has no effect on cell viability（a）Western 雜交顯示兩條 TMUB1 siRNA 下調(diào) TMUB1 蛋白表達(dá)水平；（b）q RT-PCR 表明兩條 TMUB1 siRNA下調(diào) TMUB1 m RNA 轉(zhuǎn)錄水平；（c）下調(diào) TMUB1 表達(dá)對細(xì)胞活力無影響在上述研究基礎(chǔ)上，利用兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 對 A549 細(xì)胞進(jìn)行干擾，分別感染不同亞型的流感病毒 WSN、H5N1、H9N2，在病毒感染后 24 h 和 48 h 收取含有病毒的細(xì)胞上清，進(jìn)行蝕斑滴定。結(jié)果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調(diào) TMUB1 表達(dá)后，均能顯著抑制不同亞型流感病毒的復(fù)制（圖 2-3）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cloning and Characterization of DULP,a Novel Ubiquitin-Like Molecule from Human Dendritic Cells[J]. Guoyan Liu1,2,Shuxun Liu1,2,Ping Li1,Ling Tang1,Yanmei Han1,Huazhang An1,Jiangyan Li1,Xiankun Dai1,Nan Li1,Xuetao Cao1 and Yizhi Yu1,31Institute of Immunology and State Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2Guoyan Liu and Shuxun Liu contributed equally to this study;. Cellular & Molecular Immunology. 2009(01)
本文編號：3575339
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