流感病毒屬于正黏病毒科,流感病毒屬。流感病毒是重要的人獸共患性病原,可引起人和多種動物感染和發(fā)病。流感病毒的高變異性極易引起流感大流行和跨種間傳播,對人類的生命安全構成重大的威脅。因此,抗流感病毒藥物研發(fā)具有重要的意義。通過全基因組siRNA文庫以及報告性流感病毒可以實現(xiàn)對參與流感病毒復制調控的宿主因子的高通量篩選,為抗流感病毒藥物研發(fā)提供潛在的靶點。本實驗室前期通過全基因組siRNA文庫以及H5N1 NA-Venus報告病毒篩選出參與流感病毒復制調控的宿主因子。結合siRNA文庫篩選標準,確定了宿主因子跨膜和泛素樣結構域蛋白1（Transmembrane and ubiquitin-like domain-containing 1,TMUB1）。在本研究中,通過蝕斑實驗證實利用siRNA干擾下調TMUB1表達以及利用CRISPR/Cas9技術敲除TMUB1均可顯著抑制流感病毒復制。為了探究TMUB1影響流感病毒生活周期的具體階段,本研究通過Western雜交檢測TMUB1對流感病毒感染后不同時間點病毒蛋白表達的影響,發(fā)現(xiàn)TMUB1敲除后在病毒感染4 h時可顯著抑制各個病毒蛋白的表達,... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

下調TMUB1表達抑制H5N1NA-Venus報告病毒的感染率

中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第二章 TMUB1 促進流感病毒復制為了驗證兩條 TMUB1 siRNA 的干擾效率，首先將兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 轉染A549 細胞，然后利用 Western 雜交檢測 TMUB1 蛋白的表達情況，結果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調 TMUB1 蛋白表達水平（圖 2-2a）；利用 qRT-PCR 檢測 TMUB1mRNA 的轉錄，結果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 均能顯著下調 TMUB1 mRNA 的轉錄水平（圖 2-2b）。為了排除 TMUB1 siRNA 轉染對細胞的影響，檢驗了兩條 TMUB1 siRNA干擾后，對 A549 細胞活力的影響。結果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調 TMUB1表達后對細胞活力無顯著影響（圖 2-2c）。

圖 2-2 下調 TMUB1 表達對細胞活力無影響Fig. 2-2 Knockdown of TMUB1 has no effect on cell viability（a）Western 雜交顯示兩條 TMUB1 siRNA 下調 TMUB1 蛋白表達水平；（b）q RT-PCR 表明兩條 TMUB1 siRNA下調 TMUB1 m RNA 轉錄水平；（c）下調 TMUB1 表達對細胞活力無影響在上述研究基礎上，利用兩條 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 對 A549 細胞進行干擾，分別感染不同亞型的流感病毒 WSN、H5N1、H9N2，在病毒感染后 24 h 和 48 h 收取含有病毒的細胞上清，進行蝕斑滴定。結果顯示，與對照組相比，兩條 TMUB1 siRNA 干擾下調 TMUB1 表達后，均能顯著抑制不同亞型流感病毒的復制（圖 2-3）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cloning and Characterization of DULP,a Novel Ubiquitin-Like Molecule from Human Dendritic Cells[J]. Guoyan Liu1,2,Shuxun Liu1,2,Ping Li1,Ling Tang1,Yanmei Han1,Huazhang An1,Jiangyan Li1,Xiankun Dai1,Nan Li1,Xuetao Cao1 and Yizhi Yu1,31Institute of Immunology and State Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2Guoyan Liu and Shuxun Liu contributed equally to this study;.  Cellular & Molecular Immunology. 2009(01)



本文編號：3575339