將TZ060107株新城疫病毒（NDV）在CEF細(xì)胞上傳代，對(duì)其HN基因和F基因分別進(jìn)行擴(kuò)增、克隆、測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表明，所擴(kuò)增的HN基因全長(zhǎng)1801bp，編碼區(qū)由1716bp組成，共編碼571個(gè)氨基酸；所擴(kuò)增的F基因全長(zhǎng)是1725bp，編碼區(qū)由1662bp組成，共編碼553個(gè)氨基酸。第一個(gè)循環(huán)，TZ060107株新城疫病毒（NDV）在含有抗TZ060107抗體的雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）上傳代，分3個(gè)獨(dú)立系列連傳50代，同時(shí)設(shè)3個(gè)不帶抗體的獨(dú)立系列也連傳50代，每10代擴(kuò)增HN基因和F基因并測(cè)序。第二輪循環(huán)所用的起始毒株是第50代中變異最大的A1-50系列毒株。將A1-50接種10日齡SPF雞胚，用該尿囊液制成油乳劑滅活苗。免疫SPF雞，2周后再次免疫，第二次免疫十天后采集抗血清。對(duì)抗血清進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)，根據(jù)中和試驗(yàn)結(jié)果確定最適血清添加濃度為1:20，用該濃度添加血清到有抗體組形成免疫選擇壓。將A1-50毒株在含有抗A1-50抗體的CEF培養(yǎng)上分3個(gè)獨(dú)立系列連傳50代，分別為a1、a2、a3。同時(shí)設(shè)3個(gè)不帶抗體的獨(dú)立傳代系列作為對(duì)照，分別為b1、b2、b3。對(duì)第60、70、80、90、... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)及縮略詞
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原和生物學(xué)特性
        1.1.1 形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 理化性質(zhì)
        1.1.3 培養(yǎng)特性
        1.1.4 生物學(xué)特性
        1.1.5 抗原性和毒力
    1.2 基因組結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.2 基因組結(jié)構(gòu)蛋白
    1.3 致病性
        1.3.1 致病性的概述
        1.3.2 致病性的分子基礎(chǔ)
    1.4 流行病學(xué)
        1.4.1 流行病學(xué)概況和特點(diǎn)
        1.4.2 易感動(dòng)物
        1.4.3 傳播途徑和流行方式
        1.4.4 我國(guó)新城疫流行趨勢(shì)
    1.5 免疫
        1.5.1 新城疫免疫
        1.5.2 免疫和疫苗的關(guān)系
    1.6 免疫選擇壓對(duì)病毒的影響
        1.6.1 RNA 病毒的易變異性
        1.6.2 免疫選擇壓發(fā)揮作用的客觀指標(biāo)
        1.6.3 免疫選擇壓相關(guān)的研究成果
        1.6.4 免疫選擇壓對(duì)病毒抗原性的影響
    1.7 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 SPF 雞和 SPF 雞胚
        2.1.3 主要分子生物學(xué)試劑和試劑盒
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)材料
        2.1.5 引物
    2.2 方法
        2.2.1 病毒和細(xì)胞
        2.2.2 抗NDVA1 -50 單因子血清的制備
        2.2.3 最適血清添加濃度的確定
        2.2.4 病毒在 CEF 細(xì)胞上的傳代
        2.2.5 病毒 HN基因和 F 基因的擴(kuò)增克隆測(cè)序
        2.2.6 病毒間的交叉HI 試驗(yàn)
3 結(jié)果
    3.1 最適血清添加濃度的確定
    3.2 PCR 結(jié)果（見(jiàn)圖 3-1 和圖 3-2）
    3.3 抗體選擇壓作用下 HN 基因和 F基因的變異結(jié)果
        3.3.1 HN 基因和 F 基因的遺傳穩(wěn)定性
        3.3.2 后 50代 HN 基因和 F 基因核苷酸序列比較結(jié)果（詳見(jiàn)附錄）
        3.3.3 抗體選擇壓下新城疫病毒 HN 基因的變異
        3.3.4 抗體選擇壓下新城疫病毒 F基因的變異
    3.4 交叉 HI試驗(yàn)結(jié)果和抗原性變化
        3.4.1 第一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.2 第二組實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4 討論
    4.1 抗體選擇壓作用下 H N 基因的變異
    4.2 抗體選擇壓作用下 F基因的變異
    4.3 新城疫病毒抗原性的變異
5. 結(jié)論
附圖
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體免疫選擇壓下的變異[J]. 趙鵬,馬誠(chéng)太,崔治中.  中國(guó)科學(xué):生命科學(xué). 2010(10)
[3]細(xì)胞培養(yǎng)上新城疫病毒HN基因在抗體免疫選擇壓作用下的抗原表位變異[J]. 鞏艷艷,崔治中.  中國(guó)科學(xué)（C輯:生命科學(xué)）. 2009(12)
[4]抗體選擇壓作用下H9N2亞型禽流感病毒HA基因的變異[J]. 婁本紅,朱秀同,孫貝貝,崔治中.  微生物學(xué)報(bào). 2009(07)
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[6]雞新城疫的流行特點(diǎn)及防治[J]. 王占林.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2008(07)
[7]新城疫疫苗的研究進(jìn)展[J]. 葛鑫,路學(xué)華,劉懷然,閆麗輝,劉培欣,孔憲剛,馮新暢.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2008(02)
[8]雞胚中新城疫強(qiáng)毒的分離、鑒定與生物學(xué)特性研究[J]. 孫淑紅,崔治中.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(07)
[9]雞新城疫疫苗研究進(jìn)展[J]. 王賀民,秦素琴,魏濤.  中國(guó)家禽. 2006(18)
[10]新城疫病毒HN和F基因遺傳變異相關(guān)性的研究[J]. 秦卓明,馬保臣,何葉峰,王友令,崔治中,徐懷英,袁小遠(yuǎn).  微生物學(xué)報(bào). 2006(02)



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