家兔呼吸道傳染病發(fā)病率高,波及范圍廣,造成的經(jīng)濟(jì)損失大,尤以兔肺炎克雷伯氏菌�。↘lebsiella pneumonia disease,KPD）、兔瘟（兔出血癥、Rabbit hemorrhagic disease,RHD）、兔多殺性巴氏桿菌�。≒asteurellosis）和兔支氣管敗血波氏桿菌�。˙ordetellosis）發(fā)病率高,危害大。由于它們具有相似的臨床表現(xiàn)與病理變化,給準(zhǔn)確診斷帶來(lái)了困難。為了能及時(shí)、準(zhǔn)確、快速診斷家兔這4種具有相似病變的疾病,本實(shí)驗(yàn)建立了一種能夠同時(shí)檢測(cè)這4種病原的MPCR方法。根據(jù)GenBank中的肺炎克雷伯菌（KP.）的16S rRNA V2可變區(qū)基因、兔瘟病毒（RHDV）的VP60基因、多殺性巴氏桿菌（P. multocida）的ktm1基因和支氣管敗血波氏桿菌（B. bronchiseptica）的ptxA基因,設(shè)計(jì)4對(duì)引物,序列分別為P1：AGCACAGAGAGCTTG; P2:ACTTTGGTCTTGCGAC; P3: TCGCTCAACAACTACTCG; P4:TAGTTGCAGCTCTTGCCT; P5: ATCCGCTATTTAC... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1. 國(guó)內(nèi)家兔養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    2. 家兔呼吸道疾病的病因
        2.1 生物性因素
            2.1.1 兔肺炎克雷伯氏菌
            2.1.2 兔瘟病毒(兔出血癥病毒)
            2.1.3 兔多殺性巴氏桿菌
            2.1.4 兔支氣管敗血波氏桿菌
            2.1.5 兔致病性金黃色葡萄球菌
            2.1.6 兔肺炎鏈球菌
            2.1.7 兔粘液瘤病毒
        2.2 非生物性因素
    3. 家兔主要呼吸道疾病的臨床表現(xiàn)與病理變化
    4. 家兔呼吸道疾病的診斷方法
    5. 多重PCR(MPCR)技術(shù)概述
第二部分 實(shí)驗(yàn)部分
    1. 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株和毒株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要設(shè)備
            1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 模板和引物制備
            1.2.1 細(xì)菌及病毒培養(yǎng)
            1.2.2 細(xì)菌DNA模板的提取
            1.2.3 病毒RNA提取和cDNA模板合成
            1.2.4 引物設(shè)計(jì)和制備
        1.3 多重PCR(MPCR)檢測(cè)方法的優(yōu)化和確立
            1.3.1 單重PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和確立
            1.3.2 多重PCR(MPCR)檢測(cè)方法的優(yōu)化和確立
        1.4 多重PCR(MPCR)方法的特異性和靈敏度試驗(yàn)
            1.4.1 單重PCR方法的特異性試驗(yàn)
            1.4.2 多重PCR(MPCR)方法的特異性試驗(yàn)
            1.4.3 單重PCR方法的靈敏度試驗(yàn)
            1.4.4 多重PCR(MPCR)方法的靈敏度試驗(yàn)
        1.5 多重PCR(MPCR)方法的臨床檢測(cè)試驗(yàn)
            1.5.1 人工感染家兔病料制備
            1.5.2 病料模板的提取
            1.5.3 多重PCR(MPCR)方法檢測(cè)病料
    2. 結(jié)果
        2.1 多重PCR(MPCR)檢測(cè)方法的優(yōu)化和確立
            2.1.1 單重PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和確立
            2.1.2 多重PCR(MPCR)檢測(cè)方法的優(yōu)化
        2.2 多重PCR(MPCR)方法的特異性和靈敏度試驗(yàn)
            2.2.1 單重PCR方法的特異性試驗(yàn)
            2.2.2 多重PCR(MPCR)方法的特異性試驗(yàn)
            2.2.3 單重PCR方法的靈敏度試驗(yàn)
            2.2.4 多重PCR(MPCR)方法的靈敏度試驗(yàn)
        2.3 多重PCR(MPCR)方法臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
    3. 討論
        3.1 家兔呼吸道疾病危害及其診斷
        3.2 多重PCR(MPCR)技術(shù)及其應(yīng)用
        3.3 多重PCR(MPCR)引物的設(shè)計(jì)
        3.4 多重PCR(MPCR)反應(yīng)條件的優(yōu)化
    4. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兔肺炎球菌病的診治[J]. 李鐵,何蘭玲,王正華.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn). 2014(01)
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碩士論文
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[2]兔瘟病理學(xué)研究[D]. 寧玲忠.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[3]多重PCR診斷豬5種繁殖障礙性疾病的方法研究[D]. 曹洪志.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[4]兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及某些生物學(xué)特性研究[D]. 范志宇.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3572409