龔地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是重要的寄生原蟲。脂類代謝對弓形蟲的生長發(fā)育極為重要。已知生物細胞的長鏈酰基輔酶A可通過�；o酶A結合蛋白（acyl-CoA binding protein,ACBP）和甾醇載體蛋白（sterol carrier protein 2,SCP2）轉(zhuǎn)運到不同細胞器參與脂類合成。我們通過數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)弓形蟲存在兩種�；o酶A結合蛋白,TgACBP1和TgACBP2,也具有甾醇載體蛋白TgSCP2,但未見對弓形蟲ACBPs和SCP2的功能和作用機制的研究報道。首先我們證實了弓形蟲體內(nèi)存在ACBP1和ACBP2。通過構建內(nèi)源性標記蟲株,發(fā)現(xiàn)ACBP1分布于胞漿;胞內(nèi)和胞外蟲體的ACBP2的定位存在差異,分別定位于線粒體和蟲體外膜。胞內(nèi)蟲體的ACBP2處于去磷酸化狀態(tài),胞外蟲體的ACBP2處于磷酸化狀態(tài),高濃度[K+]和低濃度[Ca2+]條件下胞外蟲體ACBP2發(fā)生去磷酸化;高濃度[K+]條件下胞外蟲體ACBP2發(fā)生轉(zhuǎn)位。胞外酶活實驗顯示ACBP1和ACBP2重組蛋白均能夠結合NBD-C16:0-CoA,利用酵母回補實驗證實TgACBP1和TgACB... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３．１－１?ＴｇＡＣＢＰ２內(nèi)源性標記蟲株的構建??

圖３．２－３?ＴｇＡＣＢＰＩ和ＴｇＡＣＢＰ２的結構域分析??色表示�；o酶Ａ結合結構域，橙色表示信號肽，綠色表示錨蛋白重復序Ｆｉｇ?３．２－３?Ｄｏｍａｉｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰＩ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??ｒｅｓｅｎｔｓ?ＡＣＢＤ，?ｏｒａｎｇｅ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎａｌ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ａｎｄ?ｇｒｅｅｎ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?結構在線預測軟件ＰＳＩＰＲＥＤ，進一步分析ＴｇＡＣＢＰ?１，發(fā)現(xiàn)ＡＣＢＤ結構域均含有４個ａ螺旋簇（圖３．２－４）。??ＴｇＡＣＢＰＩ?Ｂ．?ＴｇＡＣＢＰ２??ＵＩＩＩｉｎｉｌｌｌｌ９３ｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉａａａ３．〇｛?ｃ〇ｎｆ?）ａ３ａａａｎ３９ｉａａＢｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌ３３３ｌｌｌｌ＿＾?＞?〇?■?￣ｖ－?ＩＤ?ＧＣＣＨＫＨＨＫＨＨＨＨＭＨＨ＞：ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＨＨＨｈＨＨＨＨＨＨＨＣＣ?Ｐ?＊?：??ＡＳＱＥＥＦＥＲＡＡＫＹＶａＴＳＧＫ￡ＳＧＬＮＰＴＴＥ〇ＫＬＥＦＹＫＹＹＫ〇Ａ?ＡＡ?：?ＳＵＬＬＦｗＨＣＰＶ?Ｘ?ＥＩ?ＴＴＤＤＶＥＧＧＰＴＣＫＬＰＫ?．?ＦＮＥ１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０３ｌｌｉｍｍｉｉ３３３３３３３ｌｌｌ９ａ３ｌｌｌｌｉｎｉｌｌｌｌｌｉ?Ｃｏｎ（?：?：｜｜｜｜｜３３３３３３｜？｜８１１８３３３｜｜｜｜｜｜｜９３９９＾?＾???Ｐｒ費ｄｓ??ｆｌ?）?“??ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨｈＨ．－ｉｈｎｈＨＣＣＣＣＣｈＨＨｈＨＨＨＨＨ?Ｆｚｔ－＾?：?ＣＣＣＣＣＪＣＣＣＨＨＨＭＭＨＨＭＨＭＨＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＭＶＧＯＣＳＥＰＡＰＧＦＬＡＦＥＡ

圖３．２－５?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的三級結構??箭頭表示ＡＣＢＤ結構域中的“結合口袋”，橙色、亮綠色、淺綠色和藍色球狀結構分別代表保守性的丙氨酸、??甘氨酸、色氨酸和賴氨酸。??Ｆｉｇ?３．２－５?３Ｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰｌ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??Ｔｈｅ?ａｒｒｏｗ?ｉｎｄｉｃａｔｅｓ?ｔｈｅ?＂＇ｂｉｎｄｉｎｇ?ｐｏｃｋｅｆ?ｏｆ?ＡＣＢＤ?ｄｏｍａｉｎ．?Ｏｒａｎｇｅ，?ｌｉｍｅ，?ａｑｕａ?ａｎｄ?ｂｌｕｅ?ｂａｌｌｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?Ａｌａ，?Ｇｌｙ，??Ｔｒｐ?ａｎｄ?Ｌｙｓ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．??．２?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的克隆、表達與鑒定??以弓形蟲ＲＨ反轉(zhuǎn)錄ｃＤＮＡ為模板，ＰＣＲ擴增，分別獲得全長２８８ｂｐ、９３６ｂｐ的??ＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２，并連接到了Ｔ載體上（圖３．２－６）。??Ａ???Ｂ???Ｃ????ｉ．＇本靈函??１００?ｉ〇〇ｂｐ－Ｃ??－?＇?１??……’＇


本文編號：3564195