【目的】本研究從蘭州及其附近地區(qū)奶牛場分離出引起奶牛乳房炎的病原菌，進(jìn)行耐藥性分析；篩選出抑菌效果好的中藥作為消除劑，作用于臨床分離的葡萄球菌與大腸桿菌，通過檢測中藥提取液對耐藥菌的耐藥質(zhì)粒、耐藥基因和耐藥酶的表達(dá)與含量等耐藥性因素影響，以探究耐藥菌耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制和消除耐藥性的方法，并為臨床耐藥菌引起疾病的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)�！痉椒ā繌奶m州及其附近地區(qū)奶牛場采集樣品，對病原菌進(jìn)行分離鑒定，分離出致病性葡萄球菌與大腸桿菌；做藥敏試驗(yàn)確定耐藥性菌株；用二倍肉湯稀釋法確定中藥的最小抑菌濃度（MIC）與亞抑菌濃度；用影印培養(yǎng)法篩選質(zhì)粒消除子，并通過堿裂解法對質(zhì)粒進(jìn)行抽提，經(jīng)瓊脂凝膠糖電泳后，分析比較不同中藥MIC提取液作用后耐藥菌株質(zhì)粒條帶的變化與差異；用紙片酸定量法篩選產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的細(xì)菌，超聲破碎法提取酶粗提液紙，用中藥亞抑菌濃度提取液作用耐藥菌株，分析中藥對超ESBLs活性和含量的影響；根據(jù)GenBank中已發(fā)布的mecA基因序列，利用軟件設(shè)計(jì)一對引物，用PCR法檢測耐藥mecA基因，對目的片段進(jìn)行測序，做中藥對耐藥基因mecA的失活試驗(yàn)，比較中藥對病原菌耐藥基因me... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一章 緒論
    1 乳房炎病原菌耐藥性及中藥消除耐藥性的研究概況
        1.1 乳房炎
            1.1.1 奶牛乳房炎危害
            1.1.2 乳房炎的病原菌分類
            1.1.3 乳房炎的治療及耐藥性分析
        1.2 細(xì)菌耐藥性研究進(jìn)展
            1.2.1 細(xì)菌耐藥的現(xiàn)狀
            1.2.2 染色體介導(dǎo)的耐藥
            1.2.3 質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥
            1.2.4 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的耐藥性,
            1.2.5 滅活酶與鈍化酶的產(chǎn)生
            1.2.6 細(xì)胞膜通透性的改變
            1.2.7 抗生素結(jié)合靶位的改變
            1.2.8 主動外輸系統(tǒng)
        1.3 中藥對奶牛乳房炎的研究概況
        1.4 細(xì)菌耐藥質(zhì)粒消除的概況
        1.5 超廣譜β -內(nèi)酰胺酶研究概況
        1.6 中藥影響耐藥基因的研究概況
第二章 引起奶牛乳房炎葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.1 菌種
            1.1.2 主要儀器
            1.1.3 培養(yǎng)基
            1.1.4 主要試劑
            1.1.5 藥敏紙片
            1.1.6 試驗(yàn)動物
        1.2 試驗(yàn)方法與步驟
            1.2.1 樣本的采集分離與生化試驗(yàn)
            1.2.2 藥敏試驗(yàn)
            1.2.3 動物實(shí)驗(yàn)
            1.2.4 葡萄球菌 16S rRNA 基因序列分析
            1.2.5 耐藥菌分析
    2 結(jié)果
        2.1 細(xì)菌分離鑒定與生化鑒定
        2.2 藥敏試驗(yàn)
        2.3 動物試驗(yàn)
        2.4 葡萄球菌 16s rRNA 序列分析
        2.5 耐藥菌分析
    3 討論
第三章 中藥對引起奶牛乳房炎細(xì)菌耐藥性消除作用的研究
    1. 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.1 藥物
            1.1.2 菌種
            1.1.3 培養(yǎng)基
            1.1.4 主要儀器
            1.1.5 主要試劑
        1.2 試驗(yàn)方法與步驟
            1.2.1 中藥原液的制備
            1.2.2 中藥水提與醇提液最小抑菌濃度的測定
            1.2.3 中藥水提與醇提液亞抑菌抑菌濃度的測定
            1.2.4 含藥平板中抗菌藥物母液的配制
            1.2.5 藥物平板的制備
        1.3 耐藥金黃色葡萄球菌質(zhì)粒體外消除試驗(yàn)
        1.4 中藥提取液消除超廣譜β -內(nèi)酰胺酶的耐藥作用
            1.4.1 超廣譜β -內(nèi)酰胺酶菌株的篩選
            1.4.2 9 種中藥消除耐菌株耐藥酶試驗(yàn)
            1.4.3 超聲破碎法制備 ESBLs 粗提液
            1.4.4 測定酶最佳反應(yīng)時(shí)間
            1.4.5 ESBLs 活性測定
            1.4.6 ESBLs 的含量測定
            1.4.7 資料處理
        1.5 中藥對耐藥基因 mecA 影響試驗(yàn)
            1.5.1 本試驗(yàn)中藥 MIC 的測定
            1.5.2 PCR 法檢測耐藥 mecA 基因引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.5.3 PCR 擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件
            1.5.4 目的片段的回收與測序
            1.5.5 中藥對耐藥 mecA 基因的失活試驗(yàn)
            1.5.6 PCR 檢測經(jīng)中藥作用后的 mecA 基因
    2 結(jié)果
        2.1 21 味中藥水提液最小抑菌濃度和亞抑菌濃度的測定結(jié)果
        2.2 9 味中藥醇提液最小抑菌濃度和亞抑菌濃度的測定結(jié)果（mg/mL）
        2.3 耐藥質(zhì)粒體外消除試驗(yàn)
            2.3.1 耐藥消除率
            2.3.2 質(zhì)粒的檢測
        2.4 中藥提取液消除超廣譜β -內(nèi)酰胺酶的作用
            2.4.1 測定酶最佳反應(yīng)時(shí)間
            2.4.2 ESBLs 活性測定及抑酶試驗(yàn)
            2.4.3 ESBLs 的含量測定結(jié)果
        2.5 經(jīng)中藥作用后 mecA 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳分析
    3 討論
        3.1 中藥提取液對耐藥菌株耐藥質(zhì)粒的消除作用
        3.2 中藥水與醇提液對細(xì)菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制作用
        3.3 中藥對 mecA 基因的影響
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介
導(dǎo)師簡介
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙黃連、清開靈對耐藥大腸埃希菌R質(zhì)粒及β-內(nèi)酰胺酶的影響[J]. 何明,吳崢嶸,李淵,曹穎,陶慶春,張永生,郝素英,關(guān)杉.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(02)
[2]禽源金黃色葡萄球菌耐藥性監(jiān)測[J]. 馬馳,林居純,陳雅莉,覃春紅,張輝建.  中國獸醫(yī)雜志. 2010(09)
[3]3種中藥方劑對大腸埃希菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的抑制作用[J]. 蘆亞君,程寧.  中國醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2010(13)
[4]整合子-基因盒系統(tǒng)與細(xì)菌耐藥性[J]. 陶陶,姜海洋,付建平,金虹.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(11)
[5]中藥乳房灌注劑治療奶牛臨床型乳房炎[J]. 張振國,秦曉慶,趙樹臣,侯振中.  中國獸醫(yī)雜志. 2010(04)
[6]奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及耐藥性分析[J]. 倪春霞,蒲萬霞,胡永浩,鄧海平,王玲,孟曉琴.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(02)
[7]中藥復(fù)方制劑對大腸埃希菌多重耐藥基因AcrA-mRNA表達(dá)水平的影響[J]. 任玲玲,鞠玉琳,平家奇,張宇.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(02)
[8]中藥柴貝止癇湯對難治性癲癇大鼠多藥耐藥基因MDR1表達(dá)的研究[J]. 劉金民,鄭香春.  天津中醫(yī)藥. 2009(06)
[9]中藥“連黃”對巴氏桿菌耐藥性的影響[J]. 苗春光,鞠玉琳,高威,任玲玲,崔洪鈞.  延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2009(03)
[10]雞大腸桿菌耐藥質(zhì)粒的研究進(jìn)展[J]. 許虹,杜海燕,牛藝儒.  山東畜牧獸醫(yī). 2009(04)

博士論文
[1]以MRSA多重耐藥蛋白PBP2a為靶點(diǎn)從中藥中尋找抗菌增敏劑的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 董燕.第三軍醫(yī)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]不同中藥對3種細(xì)菌耐藥質(zhì)粒的消除作用研究[D]. 馬馳.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及停乳鏈球菌莢膜多糖的提純[D]. 王正兵.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]鴨源性E.coli耐藥相關(guān)基因mRNA表達(dá)差異分析及中藥對E.coli耐藥性的消除試驗(yàn)[D]. 張奎.西南大學(xué) 2009
[4]新疆部分地區(qū)奶牛隱性乳房炎大腸桿菌的初步研究[D]. 徐志光.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3563541