日本乙型腦炎是一種由乙型腦炎病毒（JEV）感染引起的蟲媒性人畜共患傳染病,在全世界范圍尤其亞洲的大部分地區(qū)傳播。豬是乙型腦炎病毒傳播和增殖過程中重要的儲存宿主和傳染源。乙型腦炎對于豬群的危害非常嚴重,可造成懷孕母豬的流產(chǎn)死產(chǎn)和豬群的繁殖障礙。偽狂犬病是一類由偽狂犬病病毒（PRV）引起多種動物發(fā)病的急性動物疫病,主要引起動物的神經(jīng)癥狀、呼吸道癥狀和母豬的流產(chǎn)、死產(chǎn)以及不育等,對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。近年來隨著轉(zhuǎn)基因等生物技術(shù)的快速發(fā)展,動物的分子抗病育種得到長足的進步,可以從源頭上控制疫病尤其是病毒性疾病的發(fā)生。分子抗病育種的關(guān)鍵是廣譜、高效的抗病基因發(fā)掘、功能驗證和分子機制的研究。近年來已有多篇文獻指出人和鼠源的IFITM蛋白對于多種有囊膜的RNA病毒均具有很好的抑制病毒增殖的效果。鑒于此,本研究開展了豬源IFITM3對有囊膜RNA病毒JEV和DNA病毒PRV的抑制效果和相關(guān)機制的探討,主要包括以下內(nèi)容：1. sIFITM3對JEV的抗病毒效應(yīng)以及機制研究使用100PFU和50PFU的JEV（SA14-14-2株、P3株和SX09S-01株）同時感染sIFITM3過表達細胞BHK-... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
1 文獻綜述
    1.1 日本乙型腦炎簡介
    1.2 偽狂犬病簡介
    1.3 IFITM蛋白介紹
    1.4 IFITM3的抗病毒研究進展
        1.4.1 IFITM3抑制西尼羅河病毒和登革熱病毒的早期復(fù)制
        1.4.2 IFITM蛋白抑制甲型流感病毒和黃病毒在進入時的感染
        1.4.3 IFITM抑制流感病毒和黃病毒屬病毒感染的可能機制
        1.4.4 IFITM3抑制VSV G蛋白介導(dǎo)的病毒的進入過程
    1.5 小結(jié)
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 毒株、細胞與菌株
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 工具酶及主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.6 實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 樣品基因組DNA的提取
        3.2.2 樣品總RNA的提取
        3.2.3 樣品總RNA的RT-PCR
        3.2.4 目的基因的PCR擴增檢測
        3.2.5 PCR產(chǎn)物的電泳檢測
        3.2.6 目的基因的實時熒光定量PCR擴增檢測
        3.2.7 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.8 質(zhì)粒的制備
        3.2.9 蛋白免疫印跡(Western blot)檢測目的蛋白的表達
        3.2.10 細胞的傳代
        3.2.11 病毒的擴增
        3.2.12 病毒毒價的測定
        3.2.13 病毒的吸附與進入實驗
        3.2.14 小鼠的半數(shù)致死量(MLD_(50))的測定
        3.2.15 小鼠攻毒試驗
        3.2.16 實驗丟棄物的無害化處理
        3.2.17 統(tǒng)計學(xué)方法
4 結(jié)果與分析
    4.1 細胞水平評價sIFITM3對JEV復(fù)制的影響及機制研究
        4.1.1 過表達sIFITM3對JEV增殖的影響
        4.1.2 沉默sIFITM3對JEV增殖的影響
        4.1.3 sIFITM3抑制JEV增殖的機制探討
    4.2 細胞水平評價sIFITM3對PRV復(fù)制的影響及機制研究
        4.2.1 細胞水平過表達sIFITM3對PRV增殖的影響
        4.2.2 沉默sIFITM3對PRV增殖的影響
        4.2.3 sIFITM3抑制PRV增殖的機制探討
    4.3 過表達sIFITM3轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建以及抗JEV和PRV的初步研究
        4.3.1 過表達sIFITM3轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建
        4.3.2 sIFITM3對JEV在轉(zhuǎn)基因小鼠模型上增殖的抑制
        4.3.3 sIFITM3對PRV在sIFITM 3轉(zhuǎn)基因小鼠模型上增殖的抑制
5 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 sIFITM3抑制JEV的增殖及其相關(guān)機制的初步研究
        5.1.2 sIFITM3抑制PRV的增殖及其相關(guān)機制的初步研究
        5.1.3 過量表達sIFITM3轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建
        5.1.4 sIFITM3在機體水平上對JEV和PRV增殖的影響
    5.2 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]乙型腦炎的流行及新型腦炎病毒[J]. 程澤華.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2003(06)

碩士論文
[1]豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定及E基因假病毒的構(gòu)建[D]. 曹齊樹.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]慢病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠制備技術(shù)研究[D]. 劉勤.第三軍醫(yī)大學(xué) 2008



本文編號：3563263