布魯桿菌病是由布氏桿菌（Brucella）引起的一種急性或慢性人獸共患傳染病,在我國(guó),羊種布魯桿菌（Brucella melitensis,B.melitensis）最為流行。前期研究發(fā)現(xiàn),mmu-miR-149-3p的潛在靶基因有10個(gè),分別為:Bcl6b、Nos2、Slc7a11、Olr1、Ikbke、Slc31a2、IL1rl1、Dusp16、Ifit1和Rhoc。本試驗(yàn)通過X-treme Gene高效轉(zhuǎn)染試劑,分別將5, 50和100 nmol/L,Cy3標(biāo)記的mimics轉(zhuǎn)染至RAW264.7細(xì)胞24 h后,流式細(xì)胞儀分析,篩選出最佳轉(zhuǎn)染mimics的濃度;并將mmu-miR-149-3p mimics與mmu-miR-NC mimics,按照最佳轉(zhuǎn)染濃度,轉(zhuǎn)染至RAW264.7細(xì)胞24 h后,加入TRIzol裂解細(xì)胞,提取總RNA,轉(zhuǎn)錄組獲得cDNA;利用NCBI primer設(shè)計(jì)mmu-miR-149-3p的10個(gè)潛在靶基因的特異性引物,運(yùn)用qRT-PCR方法,進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染Cy3標(biāo)記的mimics最佳濃度為100 nmol/L,其陽性率為49.94%,平均... 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(11)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

流式細(xì)胞儀篩選Cy3標(biāo)記的mimics的最佳轉(zhuǎn)染濃度

qRT-PCR檢測(cè)Olr1、Slc7a11和IL1rl1的相對(duì)表達(dá)量


本文編號(hào)：3555244