生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)是綿羊多胎性狀的重要候選基因,探討GDF9在不同發(fā)育時(shí)期的母羊生殖器官的表達(dá)規(guī)律,對(duì)揭示其調(diào)控母羊生殖器官的發(fā)育具有重要的意義。以2月齡(性成熟前)、6月齡(性成熟)和12月齡(性成熟后)這3個(gè)不同生理階段的雌性綿羊卵巢、輸卵管、子宮內(nèi)膜為對(duì)象,采用RT-PCR技術(shù)分析GDF9蛋白在相應(yīng)生殖器官中的表達(dá),并分析其相對(duì)表達(dá)量;采用免疫組織化學(xué)法對(duì)GDF9基因在相應(yīng)生殖器官中的表達(dá)進(jìn)行定位分析。熒光定量PCR結(jié)果顯示,GDF9在2月齡與6月齡間、2月齡與12月齡間的卵巢上均表現(xiàn)出極顯著的差異性(P<0.01),而6月齡與12月齡則無(wú)顯著性差異(P>0.05);GDF9在2月齡與6月齡間的子宮內(nèi)膜上表達(dá)無(wú)顯著差異(P>0.05),而在2月齡與12月齡間、6月齡與12月齡間的子宮內(nèi)膜上的表達(dá)均差異顯著(P <0.05);GDF9在3個(gè)年齡間的輸卵管上的表達(dá)均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。免疫組織化學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示,GDF9蛋白在2月齡、6月齡和12月齡綿羊子宮內(nèi)膜和輸卵管的上皮細(xì)胞及卵巢的顆粒細(xì)胞上均能表達(dá),說(shuō)明GDF9在不同生理階段的綿羊...

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圖1總RNA完整性檢測(cè)Figure1ElectrophoresisresultoftotalRNA

哉鍘＠??-△△Ct法計(jì)算GDF9基因在各個(gè)生殖器官的不同時(shí)期的相對(duì)表達(dá)量，β-actin為內(nèi)參基因校準(zhǔn)。對(duì)獲得的數(shù)據(jù)利用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。1.4GDF9基因表達(dá)定位的免疫組織化學(xué)檢測(cè)按常規(guī)法制作卵巢、輸卵管和子宮內(nèi)膜組織切片，按照UltraSensitiveS-....

圖2目的基因定量引物的PCR產(chǎn)物Figure2Thefragmentsizeoftargetgenes100bp

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖2目的基因定量引物的PCR產(chǎn)物Figure2ThefragmentsizeoftargetgenesA：β-actin；B：GDF9.GenBank上公布的綿羊GDF9（100217402）mRNA和β-actinmRNA的序列，設(shè)計(jì)特異性引物，其序列如下：....

圖3GDF9基因和β-actin基因的熔解曲線

等：綿羊生殖器官GDF9基因的表達(dá)研究ABCD圖4GDF9基因mRNA表達(dá)量及顯著性分析Figure4ExpressionandsignificanceanalysisofGDF9mRNA圖中標(biāo)注相同小寫字母代表差異不顯著（P＞0.05），不同小寫字母代表差異顯著（0.05＞P＞....

圖4GDF9基因mRNA表達(dá)量及顯著性分析

第8期李佳蓉等：綿羊生殖器官GDF9基因的表達(dá)研究ABCD圖4GDF9基因mRNA表達(dá)量及顯著性分析Figure4ExpressionandsignificanceanalysisofGDF9mRNA圖中標(biāo)注相同小寫字母代表差異不顯著（P＞0.05），不同小寫字母代表差異顯著（0....

本文編號(hào)：4001920