肌肉的成長發(fā)育受到遺傳和環(huán)境等因素作用。細(xì)胞外基質(zhì)不僅僅為細(xì)胞提供著支撐的作用,而且對(duì)于細(xì)胞的遷移、增殖和分化等生理過程也有著重要的調(diào)控作用。近來研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞外基質(zhì)(the extracellular matrix,ECM)中的富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(the secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)家族能夠調(diào)控肌肉的分化,并且SPARC在組織發(fā)育以及細(xì)胞增殖分化過程中都有著很強(qiáng)的表達(dá)。ECM2(the extracelluar matrix 2)是SPARC家族的一員。我們實(shí)驗(yàn)室前期通過高通量測序,發(fā)現(xiàn)ECM2在分化第三天牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)中的表達(dá)量顯著高于其在分化第一天MDSCs中的表達(dá)量。因此,本實(shí)驗(yàn)以從新生胎牛中分離出來的牛MDSCs為實(shí)驗(yàn)材料,探究ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響。本實(shí)驗(yàn)研究了ECM2基因在牛MDSCs分化過程中的表達(dá)情況,利用CRISPR-dCase9系統(tǒng)激活和抑制ECM2基因后,探究其對(duì)牛MDSCs分化的影響;探究E...

【文章來源】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞簡介
        1.1.2 分化標(biāo)志基因MYH3和MYOG
        1.1.3 結(jié)蛋白的研究進(jìn)展
        1.1.4 細(xì)胞外基質(zhì)的簡介
        1.1.5 SPARC家族簡介及研究進(jìn)展
        1.1.6 ECM2的概況及研究進(jìn)展
        1.1.7 PI3K信號(hào)通路概述
        1.1.8 CRISPR-dCase9系統(tǒng)概述
    1.2 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株、菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 牛MDSCs的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 WesternBlot檢測牛MDSCs分化不同天數(shù)細(xì)胞中以及培養(yǎng)液中ECM2的含量
        2.2.3 免疫熒光檢測牛MDSCs分化不同時(shí)期ECM2表達(dá)
        2.2.4 激活ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響
        2.2.5 抑制ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響
        2.2.6 ECM2通過PI3K信號(hào)通路對(duì)牛MDSCs分化的影響
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 ECM2在牛MDSCs分化過程中的表達(dá)規(guī)律
    3.2 ECM2對(duì)牛MDSCs分化的影響
        3.2.1 激活ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響
        3.2.2 抑制ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響
    3.3 ECM2基因通過PI3K信號(hào)通路對(duì)牛MDSCs的分化產(chǎn)生影響
        3.3.1 激活和抑制ECM2基因?qū)I3K和Akt蛋白以及它們的磷酸化水平的影響
        3.3.2 抑制PI3K信號(hào)通路對(duì)牛MDSCs分化的影響
4 討論
    4.1 ECM2在牛MDSCs分化過程中的表達(dá)情況
    4.2 ECM2基因?qū)εDSCs分化的影響
    4.3 ECM2基因通過PI3K信號(hào)通路對(duì)牛MDSCs的分化產(chǎn)生影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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