初步確定MEAp40-1的基因特征及其組織分布特征。根據(jù)WormBase數(shù)據(jù)庫中多房棘球蚴MEAp40-1序列設(shè)計特異性引物,利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增MEAp40-1編碼基因并構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-MEAp40-1,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并用His-Ni親和層析柱純化,制備多克隆抗體。通過間接ELISA方法檢測多克隆抗體效價,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)定位MEAp40-1在原頭蚴中的分布。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),多房棘球絳蟲表達(dá)3種不同的MEAp40（MEAp40-1～3）,分別分布在不同染色體上。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示,每個多房棘球絳蟲MEAp40基因與其相應(yīng)的細(xì)粒棘球絳蟲的同源基因組成一支。多房棘球絳蟲MEAp40-1編碼基因全長945 bp,編碼314個氨基酸。7種絳蟲的MEAp40-1蛋白很保守,均存在α晶體結(jié)構(gòu)域,并且位于該結(jié)構(gòu)域中的協(xié)同分子伴侶結(jié)合位點(diǎn)也非常保守。MEAp40-1重組蛋白大小約為37 ku,其多克隆抗體效價可達(dá)1∶409 600,可識別蟲體中的MEAp40-1天然蛋白。MEAp40-1蛋白主要分布在多房棘球蚴后端,而頭節(jié)、囊壁等其他部位均未見表達(dá)。結(jié)合以上研究結(jié)果,推測M... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

棘球絳蟲MEAp40編碼基因及其進(jìn)化分析

Western-blot分析

重組蛋白MEAp40-1的誘導(dǎo)表達(dá)與純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]日本血吸蟲主要蟲卵抗原Sjp40在感染新西蘭白兔肝臟中的表達(dá)與免疫定位[J]. 夏丹,鄧淦明,滕萍英,謝郁,李耀民,王春梅,陳淑潔,陳敏芳,麥榮嘉,廖海燕,石玲玉,歐麗妍,陳啟偉,陳曉光,周曉紅.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2015(06)
[2]肝泡球蚴病的分型與外科治療[J]. 辛維藩,吳新民,郭亞民,鄭大為,秦長春,盧巖松,白延霖,徐正光,趙順云.  中華普通外科雜志. 2000(01)
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碩士論文
[1]多房棘球蚴20.9kD囊壁蛋白基因的原核表達(dá)、組織定位及ELISA檢測方法的建立[D]. 蘇夢.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3552702