禽致病性大腸桿菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）是引起禽大腸桿菌病重要的病原體,可引起多種禽類發(fā)病,形成局部或全身典型的感染癥狀、病變,給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失。APEC的抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣,其中O抗原常作為APEC血清型分型依據(jù),且以O(shè)1、O2、O78等優(yōu)勢致病血清型為主。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是大腸桿菌細胞壁表面的主要組分,同時也是APEC致病的重要毒力因子,由脂質(zhì)A、核心多糖和O抗原側(cè)鏈等不連續(xù)的結(jié)構(gòu)區(qū)域組成。LPS分子的合成和運輸是細菌正常生存的必需條件。脂質(zhì)A與致病力密切相關(guān),是LPS分子中內(nèi)毒素活性的基團。脂質(zhì)A的結(jié)構(gòu)完整性對于APEC的致病性具有重要作用,其合成過程中所涉及的毒力基因目前成為了國內(nèi)外研究的熱點。本研究以APEC優(yōu)勢血清型O1 E516株和O78 E522株為研究對象,針對脂質(zhì)A合成過程中的兩個后期�；D(zhuǎn)移酶LpxL和LpxM,通過λ噬菌體Red同源重組技術(shù)分別構(gòu)建了 APEC E516、E522 lpxL和lpxM基因缺失株及回補株,比較其與野生株的生物學(xué)特性,進一步分析了lpxL... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１革蘭氏陰性菌的細胞膜結(jié)構(gòu)Ｗ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｃａｒｔｏｏｎ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ＾６】??

第１章／ｐｘＬ、基因缺失株和回補株的構(gòu)建??ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＺ、ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＭ、ＲｅＥ５２２Ａ／／？ｘＺ?和?ＲｅＥ５２２Ａ／／，ｘＭ〇??１．２．３遺傳穩(wěn)定性分析??將獲得的缺失株和回補株分別進行連續(xù)傳代，通過ＰＣＲ鑒定及測序結(jié)果比對，分??析菌株的遺傳穩(wěn)定性。??１．３結(jié)果??１．３．１?Ｅ５１６、Ｅ５２２菌株血清型鑒定結(jié)果??Ｅ５１６與單因子血清０１特異性凝集，對照單因子血清無自凝，確定Ｅ５１６毒株為??０１血清型；Ｅ５２２與單因子血清０７８特異性凝集，對照單因子血清無自凝，確定Ｅ５２２??毒株為０７８血清型。??０．２缺失株和回補株的構(gòu)建??１．３．２．１?／／；ａ－Ｉ和／／ｕ＇Ｍ基因和氯霉素片段的擴增??／ｐｘＺ、／ｐｘＭ基因在ＡＰＥＣ?Ｅ５１６和Ｅ５２２菌株中均高度保守，序列同源性１００％。以??Ｅ５１６為模板，用引物ＬＬＡ／ＬＬＢ擴增／ｐｘＬ基因，引物ＬＭＡ／ＬＭＢ擴增／ｐｘＭ基因，ＰＣＲ??產(chǎn)物經(jīng)１％瓊脂糖電泳鑒定得到約７００?ｂｐ左右條帶，符合預(yù)期的基因６８４?ｂｐ?（圖??２－２，?１?道）和／ｐｘＭ基因?７１５?ｂｐ?（圖?２－２，２?道）。??Ｍ?１?２??Ｍ：?２００?ｂｐ?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ??（引物?ＬＬＡ／ＬＬＢ）??２：?／／７ｘＡ／＿Ａ！｜因片段??１?（引物?ｌｍａ／ｌｍｂ?）??圖２－２?和／／；ｘＷ基因的擴增結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ／／？．ｖＺ．，?ＩｐｘＭｂｙ?ＰＣＲ??３９??

圖２－３氯霉素基因的擴增結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｔ?ｂｙ?ＰＣＲ??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]禽致病性大腸桿菌的分離鑒定和分離株毒力基因與致病性相關(guān)性研究[D]. 董向磊.揚州大學(xué) 2014
[2]禽病原性大腸桿菌E516株與尿道致病性大腸桿菌U56株毒力基因相關(guān)性與體內(nèi)外表達差異的研究[D]. 高清清.揚州大學(xué) 2010



本文編號：3552617