雞傳染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由雞傳染性法囊病病毒（Infectious bursaldisease virus, IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。IBD是危害世界養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一。除經(jīng)典毒株外，具有致病性的血清I型毒株目前還包括弱毒株、抗原變異毒株和超強毒株（very virulent Infectious bursal disease virus, vvIBDV）。IBDV各型毒株致病性不盡相同，特別是1987年vvIBDV的出現(xiàn)給IBD的防控帶來了新的挑戰(zhàn)。vvIBDV的高致死率給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。探索各型毒株致病性差異的分子基礎(chǔ)及分子機制一直是IBDV研究的熱點之一。IBDV基因功能及致病機制的早期研究主要聚焦在基因組A節(jié)段及其編碼的VP2蛋白。近來的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，基因組B節(jié)段及其編碼的VP1蛋白與vvIBDV的爆發(fā)關(guān)系密切。本研究將進一步證實B節(jié)段及其編碼的VP1蛋白與IBDV致病性增強的關(guān)系，定位其具體分子基礎(chǔ)，并從病毒自身和宿主因子兩個角度探討其分子機制。 克隆獲得HuB-1、HeB10XS02...

【文章來源】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

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摘要
Abstract
圖表目錄
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 IBD 概況
        1.1.1 IBD 的流行特點
        1.1.2 IBD 的防制
    1.2 IBDV 的結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)
        1.2.1 IBDV 的形態(tài)學(xué)及血清型分類
        1.2.2 IBDV 的基因組和編碼蛋白
    1.3 IBDV 的拯救系統(tǒng)
        1.3.1 體外轉(zhuǎn)錄拯救系統(tǒng)
        1.3.2 基于 T7 RNA 聚合酶的體內(nèi)轉(zhuǎn)錄拯救系統(tǒng)
        1.3.3 RNA 聚合酶 II 表達拯救系統(tǒng)
        1.3.4 vvIBDV 的拯救
    1.4 IBDV 的研究進展
        1.4.1 關(guān)于 IBDV A 節(jié)段的研究
        1.4.2 關(guān)于 IBDV B 節(jié)段的研究
    1.5 問題與展望
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 IBDV 全基因組的克隆與序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒、雞胚及實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 引物設(shè)計及合成
        2.1.4 病毒復(fù)狀
        2.1.5 雞胚半數(shù)致死量（ELD50）的測定
        2.1.6 SPF 雞致死率的測定
        2.1.7 IBDV 全基因組 RNA 的提取
        2.1.8 IBDV 全基因組 RNA 的反轉(zhuǎn)錄
        2.1.9 IBDV 全基因組克隆
        2.1.10 IBDV 全基因組遺傳演化分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 ELD50及 SPF 雞致死率的測定
        2.2.2 IBDV 全基因組擴增及測序
        2.2.3 IBDV 全基因組遺傳演化分析
        2.2.4 VP1 編碼氨基酸序列比對
    2.3 討論
第三章 不同亞群 VP1 蛋白對 IBDV 致病性作用研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 質(zhì)粒、細胞和單克隆抗體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 引物設(shè)計與合成
        3.1.4 核酶結(jié)構(gòu)的引入
        3.1.5 全基因組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.6 病毒拯救
        3.1.7 拯救病毒 IFA 檢測
        3.1.8 拯救病毒電鏡觀察
        3.1.9 拯救病毒 RT-PCR 鑒定
        3.1.10 拯救細胞適應(yīng)病毒體外復(fù)制動力學(xué)研究
        3.1.11 拯救細胞非適應(yīng)病毒 ELD50的測定
        3.1.12 拯救病毒致病性研究
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 感染性克隆的構(gòu)建
        3.2.2 細胞適應(yīng)病毒的拯救與鑒定
        3.2.3 細胞非適應(yīng)病毒的拯救與鑒定
        3.2.4 細胞適應(yīng)病毒體外復(fù)制動力學(xué)研究
        3.2.5 拯救重組細胞非適應(yīng)病毒 ELD50的測定
        3.2.6 試驗雞癥狀及剖檢變化
        3.2.7 重組病毒體內(nèi)復(fù)制動力學(xué)研究
        3.2.8 試驗雞的囊重比及囊指數(shù)
        3.2.9 試驗雞法氏囊的組織病理學(xué)變化
        3.2.10 細胞非適應(yīng)病毒對 SPF 雞的致死率
    3.3 討論
        3.3.1 VP1 蛋白影響 IBDV 的復(fù)制及致病性
        3.3.2 A 節(jié)段在 IBDV 的復(fù)制及致病性方面仍扮演重要角色
第四章 VP1 N 端 145-147 位氨基酸影響 IBDV 的致病性
    4.1 材料和方法
        4.1.1 質(zhì)粒、細胞和單克隆抗體
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 引物設(shè)計與合成
        4.1.4 IBDV VP1 N 端氨基酸序列比對
        4.1.5 感染性克隆的構(gòu)建
        4.1.6 病毒拯救
        4.1.7 細胞適應(yīng)毒 IFA 檢測
        4.1.8 拯救病毒電鏡觀察
        4.1.9 拯救病毒 RT-PCR 鑒定
        4.1.10 細胞適應(yīng)病毒體外復(fù)制動力學(xué)研究
        4.1.11 細胞非適應(yīng)病毒 ELD50的測定
        4.1.12 病毒致病性研究
        4.1.13 minigenome 質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.14 VP1 聚合酶活性的檢測
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 IBDV VP1 N 端氨基酸序列比對
        4.2.2 感染性克隆的構(gòu)建
        4.2.3 細胞適應(yīng)病毒的鑒定
        4.2.4 細胞非適應(yīng)病毒的鑒定
        4.2.5 細胞適應(yīng)病毒體外復(fù)制動力學(xué)研究
        4.2.6 細胞非適應(yīng)病毒 ELD50的測定
        4.2.7 試驗雞癥狀及剖檢變化
        4.2.8 重組病毒體內(nèi)復(fù)制動力學(xué)研究
        4.2.9 試驗雞的囊重比及囊指數(shù)
        4.2.10 試驗雞法氏囊的組織病理學(xué)變化
        4.2.11 細胞非適應(yīng)病毒對 SPF 雞的致死率
        4.2.12 VP1 聚合酶活性的檢測
    4.3 討論
        4.3.1 VP1 N 端 145-147 位氨基酸存在 3 種獨特的基序
        4.3.2 VP1 N 端 145-147 位氨基酸影響 IBDV 的致病性
        4.3.3 VP1 N 端 145-147 位氨基酸影響 IBDV 的復(fù)制
        4.3.4 VP1 聚合酶活性的改變是 145-147 位氨基酸影響 IBDV 復(fù)制及致病性的分子機制之一
        4.3.5 VP1 中心活性區(qū)及 C 端氨基酸影響 IBDV 的復(fù)制
        4.3.6 VP1 對 IBDV 復(fù)制及致病性影響具有多位點效應(yīng)
第五章 影響 IBDV VP1 聚合酶活性的分子機制研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 細胞、抗體和載體
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 引物設(shè)計與合成
        5.1.4 IBDV VP3 蛋白對 VP1 聚合酶活性的影響
        5.1.5 α-半乳糖苷酶定量分析實驗
        5.1.6 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 基因的擴增及克隆
        5.1.7 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 熒光定量 PCR 的建立
        5.1.8 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 在細胞及組織中的分布檢測
        5.1.9 IBDV VP1 蛋白與宿主 eIF4AII 相互作用研究
        5.1.10 宿主 eIF4AII 對 IBDV 復(fù)制的影響
        5.1.11 宿主 eIF4AII 對 IBDV VP1 聚合酶活性的影響
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 IBDV VP3 影響 VP1 聚合酶活性
        5.2.2 α-半乳糖苷酶活性檢測
        5.2.3 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 基因的擴增及克隆
        5.2.4 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 熒光定量 PCR 的建立
        5.2.5 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 在組織及細胞中的分布
        5.2.6 宿主翻譯起始因子 eIF4AII 與 IBDV VP1 蛋白之間存在相互作用
        5.2.7 宿主 eIF4AII 對 IBDV 復(fù)制的影響
        5.2.8 宿主 eIF4AII 對 IBDV VP1 聚合酶活性的影響
    5.3 討論
        5.3.1 IBDV VP3 蛋白是 VP1 發(fā)揮聚合酶活性的必要因素
        5.3.2 宿主 eIF4AII 因子與 IBDV VP1 蛋白之間存在相互作用
        5.3.3 eIF4AII 抑制 VP1 聚合酶活性是抑制 IBDV 復(fù)制的分子機制之一
        5.3.4 VP1 N 端 145-147 位氨基酸基序聚合酶活性的差異與 VP3 或 eIF4AII 之間不存在正相關(guān)關(guān)系
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于RNA聚合酶Ⅱ的傳染性法氏囊病病毒反向遺傳系統(tǒng)的建立 [J]. 魏永偉,侯賢宏,章曉棟,徐弘,呂冬梅,于漣.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2008(10)
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[4]安徽省雞免疫抑制性疾病的流行病學(xué)調(diào)查 [J]. 楊克禮,韋平,潘玲,蔣玲艷,李莉萍,陽秀英,磨美蘭,韋天超.  中國獸醫(yī)科技. 2005(08)
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[6]雞傳染性法氏囊病超強毒致弱株的生物學(xué)特性研究 [J]. 王笑梅,王秀榮,陳冠春,尹訓(xùn)南,邱冬.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 1999(06)
[7]傳染性法氏囊病病毒的生態(tài)學(xué)與流行病學(xué)研究 [J]. 周宗安,王永山,鄧小昭,刁振宇,高建,施正良,羅函祿,方元.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 1998(05)
[8]麻雀自然感染雞傳染性法氏囊病病毒的調(diào)查 [J]. 王永山,周宗安,翟春生,王元倫,方元,顧志香,王軍,肖元廷.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 1994(03)
[9]廣東地區(qū)雞傳染性囊病的研究 [J]. 畢英佐.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1985(01)
[10]北京地區(qū)雞傳染性法氏囊病病原分離 [J]. 周蛟,劉福致,陳麗永,王淑娟.  中國獸醫(yī)雜志. 1982(07)

博士論文
[1]雞傳染性法氏囊病病毒基因突變株的構(gòu)建及VP5蛋白功能研究[D]. 秦立廷.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院. 2009
[2]我國部分地區(qū)傳染性法氏囊病分子流行病學(xué)研究[D]. 宇文延青.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院. 2008
[3]雞傳染性法氏囊病病毒反向遺傳操作系統(tǒng)的建立及基因功能研究[D]. 祁小樂.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院. 2007

碩士論文
[1]利用反向遺傳操作技術(shù)構(gòu)建IBDV候選疫苗株的研究[D]. 高立.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院. 2010



本文編號：3543462