毒害艾美耳球蟲（Eimeria necatrix）是引起雞急性小腸球蟲病最重要的病原,為了對毒害艾美耳球蟲進行快速特異性檢測,本研究基于毒害艾美耳球蟲ITS-2基因序列,通過退火溫度、引物用量等反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了雞毒害艾美耳球蟲特異性納米PCR檢測方法。結(jié)果顯示,該方法成功擴增出毒害艾美耳球蟲約380 bp的特異性片段,其最低檢出質(zhì)量濃度為3.64μg/L,敏感性是普通PCR的100倍;進一步對毒害艾美耳球蟲、柔嫩艾美耳球蟲、貝氏隱孢子蟲等多種病原的DNA樣品進行擴增,該方法僅能擴增出毒害艾美耳球蟲的目的片段。利用所建立的納米PCR檢測方法對40份雞的糞便樣品進行檢測,發(fā)現(xiàn)受檢樣品中毒害艾美耳球蟲陽性率為35.0%（14/40）,與普通PCR檢測結(jié)果一致。結(jié)果表明,本研究建立的毒害艾美耳球蟲納米PCR檢測方法能夠?qū)崿F(xiàn)對毒害艾美耳球蟲的快速準確檢測,且與普通PCR相比具有更高的敏感性和特異性,為毒害艾美耳球蟲感染的臨床鑒別診斷和防控提供了技術(shù)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學報. 2020,40(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

納米PCR擴增結(jié)果

通過對納米PCR反應(yīng)條件中的退火溫度進行優(yōu)化,結(jié)果顯示,當退火溫度為60℃時,擴增條帶最亮(圖2)。進一步對體系中的引物用量進行優(yōu)化,結(jié)果顯示當引物用量為12 pmol(即分別加入0.6 μL濃度為10 μmol/L的上、下游引物)時,擴增條帶最亮(圖3)。圖3 納米PCR引物用量優(yōu)化

納米PCR引物用量優(yōu)化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]犬細小病毒高效納米PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 秦彤,周靈,由欣月,梁琳,史利軍,張建偉,李金祥,崔尚金.  畜牧獸醫(yī)學報. 2019(06)
[2]我國雞球蟲病流行病學研究進展[J]. 李超,顧小龍,盧春霞,廖琴,劉賢勇,索勛.  寄生蟲與醫(yī)學昆蟲學報. 2018(04)
[3]禽呼腸孤病毒納米PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 鄭麗,任衛(wèi)科,路超,田向?qū)W,王利麗,李秀麗,鄢明華.  中國獸醫(yī)科學. 2018(06)
[4]牛病毒性腹瀉高效納米PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 李佳暖,李得鑫,崔元,袁萬哲,孫繼國.  中國獸醫(yī)學報. 2018(02)
[5]和緩艾美球蟲與早熟艾美球蟲的分離與鑒定[J]. 李建梅,劉丹丹,任春芝,許金俊,陶建平.  中國動物傳染病學報. 2009(04)
[6]“納米粒子PCR”中納米金與聚合酶相互作用機制探討[J]. 米麗娟,朱紅平,張曉東,胡鈞,樊春海.  科學通報. 2007(08)

碩士論文
[1]毒害艾美耳球蟲子孢子cDNA文庫的構(gòu)建與篩選[D]. 杜彩娟.揚州大學 2016
[2]雞球蟲不同種株的ITS序列及RAPD分析[D]. 夏延富.湖南農(nóng)業(yè)大學 2009
[3]雞艾美耳球蟲不同種株ITS-1、ITS-2序列的克隆和分析比較[D]. 薛方民.山東師范大學 2007



本文編號：3543478