骨骼肌是機體的重要組成部分,骨骼肌的生長和損傷后修復對機體而言十分重要,同時骨骼肌的生長發(fā)育對畜牧生產也有很重要的作用。鹽酸克倫特羅（Clenbuterol, CLB）作為經典的β2腎上腺素受體激動劑,對骨骼肌的生長有顯著的促進作用,對肌肉的損傷修復也有明顯的幫助。但鹽酸克倫特羅調控肌肉發(fā)生的分子機制到底如何,目前仍不清楚。C2C12成肌細胞是體外研究肌肉發(fā)生機制常用的細胞模型之一,所以本研究采用C2C12成肌細胞作為實驗材料,探討鹽酸克倫特羅對肌肉發(fā)生過程中細胞增殖的影響。在培養(yǎng)基中加入CLB,導致C2C12細胞發(fā)生細胞周期阻滯。同時,通過BrdU標記增殖的細胞,觀察到CLB減少DNA的合成。此外,經CLB處理后,還檢測到cyclin D、cyclin E和Cdk2蛋白表達下降和p27蛋白表達升高。以上結果說明CLB會延緩C2C12細胞的細胞周期進程。通過定量PCR和熒光素酶實驗,發(fā)現(xiàn)CLB并未改變p27的轉錄水平。當在培養(yǎng)液中加入抑制蛋白生物合成的放線菌酮（Cycloheximide, CHX）,發(fā)現(xiàn)CLB抑制了p27的蛋白降解。繼而通過細胞免疫熒光染色和Western blot實... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２骨骼肌肌肉發(fā)生中細胞的譜系關系??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ａ?ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｏｓｓ?化?ｌｅ?ｌｉｎｅａｇｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ?ｏｆｓｋｄｅｔａｌ?ｍｙｏｂｌａ?別?ｓ（?Ｍｅｓｓｉｎａ?ａｎｄ?Ｃｏｓｓｕ．?２００９）??

肌酸的增加，而不是肌纖維中收縮組分的增加。??參與肥大的信號通路繁多并且比較復雜。外部的刺激（如生長因子、營養(yǎng)物質和運動訓練）??通過胞內的信號通路改變了基因轉錄和翻譯的活性，從而影響了胞內蛋白的合成和降解，如圖１－６。??５??

圖１－６骨駱肌目Ｅ大信號通路??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆｓｋｃｌｅｔａｌ?ｍｕｓｃｌｅｓ?ｕｎｄｅｒｇｏ?ｈ＼ｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ?ｇｒｏ＼ｖｔｈ（Ｊａｃｉｎｔｏ?ａｎｄ?Ｈａｌｌ．?２００３）．??如圖１－７所示，ＩＧＦ－１信號級聯(lián)系統(tǒng)是骨骼肌肥大機制中認識比較系統(tǒng)的信號通路之一。??ＩＧＦ－１通過影響了細胞増靖、分化、蛋白降解、氨基酸轉運等過程巧ａｌｄｗｉｎ?ａｎｄ?Ｈａｄｄａｄ，?２００２），促??進了肌肉肥大。事實上生長激素促合成代謝的一部分作用也被認為是通過增加ＩＧＦ－１來實現(xiàn)的。??過表掛ＩＧＦ－１能引發(fā)小鼠的肌肉肥大，促進衛(wèi)星細胞的增殖和分化（Ｗｉｌｂｏｍ?ｅｔ?ａｌ．，?２００９）。ＩＧＦ－１??信號往下游傳迸需要ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信號通路的參與。Ａｋｔ參與大量的細胞活動，比如調節(jié)葡萄糖的??轉運、肌肉細胞生長分化Ｌ：ｉ及肌肉蛋白合成。激活Ａｋｔ是實現(xiàn)肌肉肥大的重要環(huán)節(jié)，它激活了??ｍＴＯＲ，隨后ｍＴＯ民作用于下游的ｐ７０Ｓ化和ｅＩＦ４Ｂ，增加蛋白翻譯活性，最終促進肌肉蛋白合??成（Ｂｏｄｉｎｅ，?２００６）。Ａｋｔ同時抑制了?ＧＳＫ３Ｐ和ＦｏｘＯ，抑制蛋白降解。??１ＧＦ－１增加體外外培養(yǎng)的Ｃ２Ｃ１２肌管的面積是通過激活ＰＩ３Ｋ?／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ信號通路來實現(xiàn)的。??ＩＧＦ－１誘導的體外培養(yǎng)的微管的生長并不是增加肌核數Ｍ的結果（民ｏｍｍｅｌ?ｅｔ?ａｌ．，２００］）。通常認為，??衛(wèi)星細胞的激活、増殖和融合對肌肉生長Ｗ及肌肉損傷后修復至關重要（Ｃｈａｒｇｅ?ａｎｄ?Ｒｕｄｎｉｃｋｉ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同轉錄因子與p27Kip1啟動子區(qū)結合的時空順序對其表達的影響[J]. 陳巍魏,管曉翔,陳龍邦.  臨床腫瘤學雜志. 2011(02)



本文編號：3542664