發(fā)布時間：2021-12-18 15:20

　　骨骼肌是機(jī)體的重要組成部分,骨骼肌的生長和損傷后修復(fù)對機(jī)體而言十分重要,同時骨骼肌的生長發(fā)育對畜牧生產(chǎn)也有很重要的作用。鹽酸克倫特羅（Clenbuterol, CLB）作為經(jīng)典的β2腎上腺素受體激動劑,對骨骼肌的生長有顯著的促進(jìn)作用,對肌肉的損傷修復(fù)也有明顯的幫助。但鹽酸克倫特羅調(diào)控肌肉發(fā)生的分子機(jī)制到底如何,目前仍不清楚。C2C12成肌細(xì)胞是體外研究肌肉發(fā)生機(jī)制常用的細(xì)胞模型之一,所以本研究采用C2C12成肌細(xì)胞作為實(shí)驗材料,探討鹽酸克倫特羅對肌肉發(fā)生過程中細(xì)胞增殖的影響。在培養(yǎng)基中加入CLB,導(dǎo)致C2C12細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯。同時,通過BrdU標(biāo)記增殖的細(xì)胞,觀察到CLB減少DNA的合成。此外,經(jīng)CLB處理后,還檢測到cyclin D、cyclin E和Cdk2蛋白表達(dá)下降和p27蛋白表達(dá)升高。以上結(jié)果說明CLB會延緩C2C12細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程。通過定量PCR和熒光素酶實(shí)驗,發(fā)現(xiàn)CLB并未改變p27的轉(zhuǎn)錄水平。當(dāng)在培養(yǎng)液中加入抑制蛋白生物合成的放線菌酮（Cycloheximide, CHX）,發(fā)現(xiàn)CLB抑制了p27的蛋白降解。繼而通過細(xì)胞免疫熒光染色和Western blot實(shí)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２骨骼肌肌肉發(fā)生中細(xì)胞的譜系關(guān)系??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ａ?ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｏｓｓ?化?ｌｅ?ｌｉｎｅａｇｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ?ｏｆｓｋｄｅｔａｌ?ｍｙｏｂｌａ?別?ｓ（?Ｍｅｓｓｉｎａ?ａｎｄ?Ｃｏｓｓｕ．?２００９）??

肌酸的增加，而不是肌纖維中收縮組分的增加。??參與肥大的信號通路繁多并且比較復(fù)雜。外部的刺激（如生長因子、營養(yǎng)物質(zhì)和運(yùn)動訓(xùn)練）??通過胞內(nèi)的信號通路改變了基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的活性，從而影響了胞內(nèi)蛋白的合成和降解，如圖１－６。??５??

圖１－６骨駱肌目Ｅ大信號通路??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆｓｋｃｌｅｔａｌ?ｍｕｓｃｌｅｓ?ｕｎｄｅｒｇｏ?ｈ＼ｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ?ｇｒｏ＼ｖｔｈ（Ｊａｃｉｎｔｏ?ａｎｄ?Ｈａｌｌ．?２００３）．??如圖１－７所示，ＩＧＦ－１信號級聯(lián)系統(tǒng)是骨骼肌肥大機(jī)制中認(rèn)識比較系統(tǒng)的信號通路之一。??ＩＧＦ－１通過影響了細(xì)胞増靖、分化、蛋白降解、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)等過程巧ａｌｄｗｉｎ?ａｎｄ?Ｈａｄｄａｄ，?２００２），促??進(jìn)了肌肉肥大。事實(shí)上生長激素促合成代謝的一部分作用也被認(rèn)為是通過增加ＩＧＦ－１來實(shí)現(xiàn)的。??過表掛ＩＧＦ－１能引發(fā)小鼠的肌肉肥大，促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化（Ｗｉｌｂｏｍ?ｅｔ?ａｌ．，?２００９）。ＩＧＦ－１??信號往下游傳迸需要ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信號通路的參與。Ａｋｔ參與大量的細(xì)胞活動，比如調(diào)節(jié)葡萄糖的??轉(zhuǎn)運(yùn)、肌肉細(xì)胞生長分化Ｌ：ｉ及肌肉蛋白合成。激活Ａｋｔ是實(shí)現(xiàn)肌肉肥大的重要環(huán)節(jié)，它激活了??ｍＴＯＲ，隨后ｍＴＯ民作用于下游的ｐ７０Ｓ化和ｅＩＦ４Ｂ，增加蛋白翻譯活性，最終促進(jìn)肌肉蛋白合??成（Ｂｏｄｉｎｅ，?２００６）。Ａｋｔ同時抑制了?ＧＳＫ３Ｐ和ＦｏｘＯ，抑制蛋白降解。??１ＧＦ－１增加體外外培養(yǎng)的Ｃ２Ｃ１２肌管的面積是通過激活ＰＩ３Ｋ?／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ信號通路來實(shí)現(xiàn)的。??ＩＧＦ－１誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的微管的生長并不是增加肌核數(shù)Ｍ的結(jié)果（民ｏｍｍｅｌ?ｅｔ?ａｌ．，２００］）。通常認(rèn)為，??衛(wèi)星細(xì)胞的激活、増殖和融合對肌肉生長Ｗ及肌肉損傷后修復(fù)至關(guān)重要（Ｃｈａｒｇｅ?ａｎｄ?Ｒｕｄｎｉｃｋｉ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同轉(zhuǎn)錄因子與p27Kip1啟動子區(qū)結(jié)合的時空順序?qū)ζ浔磉_(dá)的影響[J]. 陳巍魏,管曉翔,陳龍邦.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2011(02)



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