UCP2和UCP3屬于線粒體內(nèi)膜蛋白,在線粒體中通過解偶聯(lián)作用抑制ATP和ROS的形成,不僅對(duì)生物機(jī)體具有保護(hù)作用,而且可能參與能量代謝。綿羊是重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之一。通過研究UCP2和UCP3基因的結(jié)構(gòu)和遺傳表達(dá)特性,有利于深入、全面地了解機(jī)體內(nèi)復(fù)雜的代謝機(jī)制。目前關(guān)于綿羊UCP2和UCP3基因的核酸序列、分子結(jié)構(gòu)、遺傳變異和表達(dá)的研究極少。本研究在]DNA、mRNA和蛋白質(zhì)3個(gè)水平上研究綿羊UCP2和UCP3基因的序列結(jié)構(gòu)、遺傳變異以及轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上的表達(dá)。采用RT-PCR、RACE和序列測(cè)定技術(shù)克隆綿羊UCP2和UCP3基因的全長(zhǎng)cDNA序列。通過電子克隆獲得兩基因的基因組序列。以UCP1基因?yàn)閰⒄?用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)南非肉用美利奴和山西肉用綿羊UCP2和UCP3 mRNA在冬春和夏秋兩個(gè)不同時(shí)段的13種組織中的差異性表達(dá)。用免疫組化技術(shù)研究?jī)蓚€(gè)基因的蛋白產(chǎn)物在6種脂肪組織中的表達(dá)。應(yīng)用多種軟件對(duì)UCP2和UCP3基因的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。主要結(jié)果如下：（1）采用RACE方法獲得綿羊UCP2基因cDNA序列全長(zhǎng)序列1641 bp,其中ORF為92... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
中英文縮略詞對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 生物能量學(xué)
        1.1 線粒體的氧化磷酸化—ATP合成
        1.2 代謝率
        1.3 體內(nèi)能量平衡
        1.4 體溫調(diào)節(jié)
    2 解偶聯(lián)蛋白家族基因(UCPs)
        2.1 UCPs的類型及其分子特性
        2.2 基因定位及其表達(dá)產(chǎn)物的分布
        2.3 半衰期
        2.4 UCP1-UCP3的進(jìn)化分析
    3 UCP2和UCP3分子調(diào)節(jié)機(jī)制的研究進(jìn)展
        3.1 質(zhì)子漏和解偶聯(lián)作用
        3.2 分子調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展
        3.3 生物學(xué)功能
        3.4 影響UCP2和UCP3基因表達(dá)的因素
        3.5 UCP2和UCP3基因的多態(tài)性研究
    4 本研究的目的與意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 綿羊UCP2和UCP3基因序列的克隆與分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法
        1.3 序列分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 綿羊UCP2基因部分cDNA序列的克隆與測(cè)序
        2.2 綿羊UCP2和UCP3基因RACE擴(kuò)增結(jié)果
        2.3 綿羊UCP2和UCP3基因序列
        2.4 不同物種間UCP2和UCP3基因的cDNA序列變異
        2.5 不同物種UCP2和UCP3氨基酸多樣性
    3 討論
        3.1 綿羊UCP2和UCP3基因調(diào)控區(qū)預(yù)測(cè)位點(diǎn)、序列的分析
        3.2 調(diào)控序列對(duì)基因表達(dá)的影響
        3.3 變異位點(diǎn)及其效應(yīng)分析
        3.4 密碼子偏性、同義替換和非同義替換
    參考文獻(xiàn)
第三章 UCP2和UCP3蛋白結(jié)構(gòu)、功能預(yù)測(cè)與分子進(jìn)化分析
    1 材料與方法
        1.1 序列的獲取
        1.2 分析方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 UCP2和UCP3蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)
        2.2 蛋白信號(hào)肽和二硫鍵預(yù)測(cè)
        2.3 糖基化位點(diǎn)
        2.4 磷酸化位點(diǎn)
        2.5 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.6 蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)
        2.7 相似性及分子系統(tǒng)進(jìn)化樹
    3 討論
        3.1 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與其功能的關(guān)系
        3.2 不同種群遺傳分化和氨基酸序列相似性分析
    參考文獻(xiàn)
第四章 綿羊UCP2和UCP3 MRNA的時(shí)空差異性表達(dá)研究
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法與操作技術(shù)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 總RNA的提取
        2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立與分析
        2.3 部分樣品擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)曲線
        2.4 樣品擴(kuò)增熔解曲線
        2.5 UCP1 mRNA的表達(dá)量及影響因素
        2.6 UCP2 mRNA的表達(dá)量及影響因素
        2.7 UCP3 mRNA的表達(dá)量及影響因素
    3 討論
        3.1 關(guān)于UCP1-UCP3 mRNA的空間性表達(dá)
        3.2 關(guān)于UCP1-UCP3 mRNA的季節(jié)性表達(dá)
    參考文獻(xiàn)
第五章 綿羊UCP2和UCP3蛋白的免疫組化分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 試驗(yàn)方法與操作技術(shù)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 免疫組化分析
        2.2 UCP2的表達(dá)量及影響因素
        2.3 UCP3的表達(dá)量及影響因素
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
特色與創(chuàng)新
附錄一 綿羊UCP2和UCP3基因全長(zhǎng)CDNA序列和對(duì)應(yīng)氨基酸序列
附錄二 綿羊UCP2和UCP3基因的DNA序列
附錄三 綿羊UCP2和UCP3基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和啟動(dòng)子預(yù)測(cè)結(jié)果
附錄四 綿羊UCP2和UCP3基因轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果
附錄五 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)對(duì)照軟件結(jié)果
附錄六 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)對(duì)照軟件結(jié)果
ABSTRACT
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3534133