發(fā)布時(shí)間：2021-12-11 07:10

　　水牛體細(xì)胞克隆是良種水�？焖贁U(kuò)繁的一種有效技術(shù)手段,但因其效率較低,尚無法推廣應(yīng)用。研究表明,來自不同水牛個(gè)體細(xì)胞的克隆效率存在明顯差異,但導(dǎo)致這種差異的機(jī)理尚不清楚。體細(xì)胞的克隆效率主要取決于其重編程的效率,而重編程的效率可能與細(xì)胞的染色質(zhì)開放度和重塑難易程度密切相關(guān)。為此,本研究擬通過比較不同克隆效率細(xì)胞系的染色質(zhì)重塑相關(guān)基因表達(dá)、染色質(zhì)開放程度和轉(zhuǎn)錄水平的差異,并探討ATP含量對(duì)染色質(zhì)重塑相關(guān)基因表達(dá)的影響,以便初步探明不同個(gè)體水牛體細(xì)胞克隆效率差異的機(jī)制,為提高水牛體細(xì)胞克隆效率奠定基礎(chǔ)。研究取得如下結(jié)果:1.不同克隆效率的水牛體細(xì)胞特征分析選擇本實(shí)驗(yàn)室建立的克隆效率存在明顯差異的2個(gè)水牛胎兒體細(xì)胞系(克隆效率較高的BFF3和克隆效率較低的BFF1),分析它們之間的染色質(zhì)重塑SWI/SNF ATP依賴性的核心酶基因SMARCA4表達(dá)差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn),BFF1中SMARCA4表達(dá)水平顯著低于BFF3(P<0.05)。兩株細(xì)胞的生長(zhǎng)特征檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在對(duì)數(shù)期的增殖速度并無明顯差異,平臺(tái)期后的BFF1細(xì)胞增殖速度低于BFF3;接觸抑制后,兩株細(xì)胞G0/G1期所占比例分別為90.75%...

【文章來源】： 廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫-中文對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1.1 影響體細(xì)胞克隆效率的因素
    1.2 表觀遺傳修飾的重編程研究進(jìn)展
        1.2.1 組蛋白修飾
        1.2.2 DNA甲基化
        1.2.3 染色質(zhì)重塑
    1.3 細(xì)胞重編程中的能量代謝
        1.3.1 氧化磷酸化途徑
        1.3.2 糖酵解途徑
    1.4 高通量測(cè)序技術(shù)
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.4.2 染色質(zhì)可及性高通量測(cè)序(ATAC-seq)
    1.5 研究目的及意義
第二章 不同克隆效率水牛體細(xì)胞染色質(zhì)開放度及轉(zhuǎn)錄水平分析
    前言
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 不同克隆效率細(xì)胞SMARCA4基因表達(dá)分析
        2.3.2 不同克隆效率細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制
        2.3.3 不同克隆效率細(xì)胞周期分析
        2.3.4 GO/G1期細(xì)胞SWI/SNF家族基因的表達(dá)分析
        2.3.5 BFF1、BFF3細(xì)胞ATAC-seq分析
        2.3.6 染色質(zhì)開放度分析
        2.3.7 RNA-seq分析
    2.4 分析討論
    2.5 小結(jié)
第三章 ATP含量對(duì)不同克隆效率細(xì)胞SWI/SNF家族主要基因表達(dá)的影響
    前言
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 試驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 魚藤酮對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.3.2 魚藤酮處理對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.3 魚藤酮處理對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響
        3.3.4 魚藤酮處理對(duì)細(xì)胞ATP含量的影響
        3.3.5 魚藤酮處理對(duì)細(xì)胞SWI/SNF家族特定基因表達(dá)的影響
        3.3.6 2-DG處理細(xì)胞ATP含量的檢測(cè)
        3.3.7 2-DG處理細(xì)胞對(duì)SWI/SNF家族基因表達(dá)的影響
    3.4 分析與討論
    3.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
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