水牛體細胞克隆是良種水牛快速擴繁的一種有效技術(shù)手段,但因其效率較低,尚無法推廣應(yīng)用。研究表明,來自不同水牛個體細胞的克隆效率存在明顯差異,但導(dǎo)致這種差異的機理尚不清楚。體細胞的克隆效率主要取決于其重編程的效率,而重編程的效率可能與細胞的染色質(zhì)開放度和重塑難易程度密切相關(guān)。為此,本研究擬通過比較不同克隆效率細胞系的染色質(zhì)重塑相關(guān)基因表達、染色質(zhì)開放程度和轉(zhuǎn)錄水平的差異,并探討ATP含量對染色質(zhì)重塑相關(guān)基因表達的影響,以便初步探明不同個體水牛體細胞克隆效率差異的機制,為提高水牛體細胞克隆效率奠定基礎(chǔ)。研究取得如下結(jié)果:1.不同克隆效率的水牛體細胞特征分析選擇本實驗室建立的克隆效率存在明顯差異的2個水牛胎兒體細胞系(克隆效率較高的BFF3和克隆效率較低的BFF1),分析它們之間的染色質(zhì)重塑SWI/SNF ATP依賴性的核心酶基因SMARCA4表達差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn),BFF1中SMARCA4表達水平顯著低于BFF3(P<0.05)。兩株細胞的生長特征檢測發(fā)現(xiàn),在對數(shù)期的增殖速度并無明顯差異,平臺期后的BFF1細胞增殖速度低于BFF3;接觸抑制后,兩株細胞G0/G1期所占比例分別為90.75%...

【文章來源】： 廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫-中文對照表
第一章 文獻綜述
    1.1 動物體細胞克隆技術(shù)研究進展
        1.1.1 影響體細胞克隆效率的因素
    1.2 表觀遺傳修飾的重編程研究進展
        1.2.1 組蛋白修飾
        1.2.2 DNA甲基化
        1.2.3 染色質(zhì)重塑
    1.3 細胞重編程中的能量代謝
        1.3.1 氧化磷酸化途徑
        1.3.2 糖酵解途徑
    1.4 高通量測序技術(shù)
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)
        1.4.2 染色質(zhì)可及性高通量測序(ATAC-seq)
    1.5 研究目的及意義
第二章 不同克隆效率水牛體細胞染色質(zhì)開放度及轉(zhuǎn)錄水平分析
    前言
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 不同克隆效率細胞SMARCA4基因表達分析
        2.3.2 不同克隆效率細胞生長曲線的繪制
        2.3.3 不同克隆效率細胞周期分析
        2.3.4 GO/G1期細胞SWI/SNF家族基因的表達分析
        2.3.5 BFF1、BFF3細胞ATAC-seq分析
        2.3.6 染色質(zhì)開放度分析
        2.3.7 RNA-seq分析
    2.4 分析討論
    2.5 小結(jié)
第三章 ATP含量對不同克隆效率細胞SWI/SNF家族主要基因表達的影響
    前言
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 魚藤酮對細胞增殖的影響
        3.3.2 魚藤酮處理對細胞凋亡的影響
        3.3.3 魚藤酮處理對細胞線粒體膜電位的影響
        3.3.4 魚藤酮處理對細胞ATP含量的影響
        3.3.5 魚藤酮處理對細胞SWI/SNF家族特定基因表達的影響
        3.3.6 2-DG處理細胞ATP含量的檢測
        3.3.7 2-DG處理細胞對SWI/SNF家族基因表達的影響
    3.4 分析與討論
    3.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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