血吸蟲病是一種存在廣泛且危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病。吡喹酮能殺死血吸蟲成蟲和尾蚴,是安全高效的治療藥物,但不能預(yù)防其感染。血吸蟲病流行和傳播的客觀因素以及該病復(fù)燃的危險(xiǎn)因素在某些地區(qū)仍然存在。新藥和疫苗的研發(fā)仍然是該病防控技術(shù)研究的重點(diǎn)。東方田鼠是對日本血吸蟲具有天然抗性的哺乳動(dòng)物,對其抗性機(jī)制研究可為血吸蟲病防控技術(shù)研究提供新的方向和線索。本文應(yīng)用DMEM灌洗東方田鼠腹腔后快速水平振蕩,分離培養(yǎng)并貼壁篩選純化巨噬細(xì)胞,建立了一種東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外分離培養(yǎng)的簡便方法。結(jié)果獲得了大量高純度的腹腔巨噬細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)正常,活細(xì)胞比例為98%。培養(yǎng)細(xì)胞吞噬墨汁顆粒功能的檢測結(jié)果表明其具有良好的吞噬功能。細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶及非特異性α-醋酸奈酚酯酶染色結(jié)果顯示獲得的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有較豐富的水解酶。結(jié)果表明快速震蕩法是一種簡易實(shí)用的體外分離培養(yǎng)東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞的方法。測定了東方田鼠感染日本血吸蟲前后血清和肝肺組織中NO含量,結(jié)果顯示感染0 d、3 d、7 d、15 d的東方田鼠血清NO含量呈上升趨勢,分別為3.99μM、4.95μM、18.89μM、23.81μM,顯著高于同時(shí)期BALB/c... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

明場下觀察巨噬細(xì)胞

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定8復(fù)染10min，PBS沖洗，甘油明膠封片。顯微觀察細(xì)胞胞漿中酶活性部位為彌漫性紅棕色產(chǎn)物、胞核為綠色。光鏡下每張爬片計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞并計(jì)算陽性率。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4.1巨噬細(xì)胞形態(tài)觀察東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)明場下觀察可見細(xì)胞核明顯，胞質(zhì)較豐富，活躍時(shí)內(nèi)含有顆�；蚩张�。東方田鼠巨噬細(xì)胞具有變形運(yùn)動(dòng)和吞噬能力，而且細(xì)胞的形狀不一，外周多突起及偽足（圖2-1）。HE染色后可見東方田鼠巨噬細(xì)胞呈圓形、橢圓形、三角形或不規(guī)則形，有偽足和突起，界限清楚。核大為卵圓形、腎形、馬蹄型或不規(guī)則形，偏居于細(xì)胞的一端，著色較深（圖2-2）。東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞和KM鼠腹腔巨噬細(xì)胞在外觀形態(tài)上相似。(a)(b)圖2-1明場下觀察巨噬細(xì)胞(a):東方田鼠巨噬細(xì)胞(b):昆明鼠巨噬細(xì)胞Fig.2-1Macrophageobservationunderbrightfield(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM(a)(b)圖2-2巨噬細(xì)胞的HE染色觀察(a):東方田鼠巨噬細(xì)胞(b):昆明鼠巨噬細(xì)胞Fig.2-2HEstainingofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定92.4.2巨噬細(xì)胞的吞噬功能將分離培養(yǎng)5d腹腔巨噬細(xì)胞加印度墨汁培養(yǎng)3h后可見其吞噬功能被激活，培養(yǎng)細(xì)胞的胞質(zhì)及偽足和突起均有密集的墨汁顆粒，吞噬率為98%，顯示東方田鼠具有較強(qiáng)的吞噬功能。同樣處理的KM鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬性也較強(qiáng)，兩者無明顯差異（圖2-3）。(a)(b)圖2-3巨噬細(xì)胞的墨汁吞噬試驗(yàn)(a):東方田鼠巨噬細(xì)胞(b):昆明鼠巨噬細(xì)胞Fig.2-3InkPhagocytosistestofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.3巨噬細(xì)胞的酸性磷酸酶表達(dá)將培養(yǎng)3d的巨噬細(xì)胞制備細(xì)胞爬片，酸性磷酸酶染色后可見東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞的胞漿內(nèi)有大量的棕黑色顆粒，陽性率為98%；KM鼠腹腔巨噬細(xì)胞胞漿的著色程度和東方田鼠類似（圖2-4）。(a)(b)圖2-4ACP染色觀察巨噬細(xì)胞的酸性磷酸酶表達(dá)(a):東方田鼠巨噬細(xì)胞(b):昆明鼠巨噬細(xì)胞Fig.2-4ACPstainingtoobservetheexpressionofacidphosphataseinmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.4巨噬細(xì)胞的非特異性酯酶表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]利用芯片技術(shù)分析不同宿主感染日本血吸蟲前后基因的差異性表達(dá)[D]. 蔣韋斌.上海師范大學(xué) 2009



本文編號：3516087