發(fā)布時(shí)間：2021-11-24 12:22

　　流感病毒各基因片段末端的包裝信號(hào)對(duì)于病毒RNA有效地包裝到病毒粒子中起著非常重要的作用,而包裝信號(hào)之間的序列也與能否成功包裝入具有復(fù)制能力的病毒粒子密切相關(guān)。本研究在PR8毒株反向遺傳操作系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,將不同核苷酸序列插入到HA包裝信號(hào)之間,進(jìn)行病毒拯救,研究影響病毒基因包裝的必須條件,并對(duì)表達(dá)外源基因重組病毒的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。為了構(gòu)建表達(dá)外源基因的流感病毒,首先將PR8病毒HA基因的包裝信號(hào)序列插入到PolI啟動(dòng)子和終止子之間,然后在包裝信號(hào)之間分別插入海腎熒光素酶基因（Renilla luciferase）、鴨坦布蘇病毒（DTMUV） E基因或密碼子優(yōu)化后的E基因、E基因結(jié)構(gòu)域Ⅲ （EDⅢ）序列或密碼子優(yōu)化后的EDin序列、H9N2亞型禽流感病毒SH441的HA基因或密碼子優(yōu)化后的HA基因,利用PR8流感病毒反向遺傳操作系統(tǒng)拯救病毒。結(jié)果顯示：插入Renilla、EDⅢ和SH441HA基因的重組病毒可以拯救成功,通過(guò)RT-PCR方法證明外源基因存在于重組病毒中。而其它幾株重組病毒拯救不成功,沒(méi)有檢測(cè)到特異性的插入序列。利用mfold軟件分析這幾種插入基因的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

禽流感病毒的粒子結(jié)構(gòu)

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)(Hoffmannetal.,2000b)

圖2-1 RP8-HA包裝信號(hào)序列表達(dá)外源基因質(zhì)粒構(gòu)建流程縮略圖Fig. 2-1 The flow chart of expression foregin genes of PR8-HA packaging signals plasmids2.2.1流感病毒PR8的HA基因包裝信號(hào)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建2.2.1.1 PBD-PR8-HA質(zhì)粒的小量抽提

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Inhibition of Japanese Encephalitis Virus Infection by Flavivirus Recombinant E Protein Domain Ⅲ[J]. Jingjing Fan,Yi Liu,Xuping Xie,Bo Zhang,Zhiming Yuan.  Virologica Sinica. 2013(03)
[2]密碼子優(yōu)化對(duì)鴨坦布蘇病毒E基因DNA疫苗免疫應(yīng)答的增強(qiáng)作用[J]. 徐大偉,李國(guó)新,李雪松,李云章,李澤君.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(05)
[3]鴨坦布蘇病毒E基因DNA疫苗構(gòu)建及免疫原性的初步研究[J]. 徐大偉,李國(guó)新,李雪松,姬希文,李云章,李澤君.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(04)
[4]鴨坦布蘇病毒抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 姬希文,閆麗萍,顏丕熙,李國(guó)新,張七斤,李澤君.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(08)
[5]反向遺傳學(xué)操作技術(shù)在禽流感研究中的應(yīng)用[J]. 靳冬,吳志明,張志凌,張健,李明義,趙雪麗.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2011(03)
[6]H5N1 avian influenza in China[J]. CHEN HuaLan Animal Influenza Laboratory of the Ministry of Agriculture and National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China.  Science in China（Series C:Life Sciences）. 2009(05)
[7]反向遺傳操作技術(shù)在流感病毒研究中的應(yīng)用[J]. 張鵬飛,杜山,李云章.  畜牧與飼料科學(xué). 2008(02)
[8]禽流感病毒血凝素分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 曹梅,田夫林,莊文忠.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(02)



本文編號(hào)：3515972