輪狀病毒是仔豬病原性腹瀉的主要致病因子之一,主要感染仔豬小腸成熟上皮細胞,其流行率可達80%,目前無特效藥治療。前人研究結(jié)果表明維生素D3對輪狀病毒感染發(fā)揮一定抗病毒作用。本研究旨在考察維生素D3是否通過調(diào)節(jié)自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑對輪狀病毒感染發(fā)揮作用。試驗一采用2×2因子試驗設(shè)計,兩個主效應(yīng)分別為輪狀病毒應(yīng)激條件（灌服病毒和不灌服病毒）和日糧VD3添加水平（200IU和5000 IU）,24頭DLY生長豬（平均體重26.2±2.02 kg）豬經(jīng)7d試驗后采集空腸和回腸樣品,測定自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑相關(guān)基因表達量。試驗二以O(shè)US株輪狀病毒感染IPEC-J2細胞為模型,在篩選病毒接毒毒力和VD3添加水平的基礎(chǔ)上,研究自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑在VD3影響輪狀病毒感染過程中發(fā)揮的作用。試驗結(jié)果表明：（1）豬體內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn),灌服輪狀病毒提高腸道GRP78、XBP1、IRE1、ATF6和CHOP的相對表達量（P<0.05）,飼糧添加高劑量VD3能夠在一定程度上抑制上述基因的表達上調(diào)；與對照組比較,輪狀病毒提高自噬標志基因Beclinl的表達,添加高劑量VD3顯著提高LC3-Ⅱ/Ⅰ和PR-39的相對... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
常用縮寫詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一章 文獻綜述
    1 維生素D_3研究進展
        1.1 維生素D_3的吸收與代謝
        1.2 維生素D_3免疫調(diào)節(jié)作用機理
            1.2.1 維生素D_3在腸道免疫方面的作用
            1.2.2 維生素D_3抗病原微生物感染的作用
            1.2.3 維生素D_3與自噬
    2 輪狀病毒
        2.1 輪狀病毒病原特點
        2.2 輪狀病毒傳播特點
        2.3 輪狀病毒臨床癥狀
        2.4 輪狀病毒引起腹瀉的可能發(fā)病機理
        2.5 輪狀病毒與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
第二章 有待研究的問題及本研究的目的、意義和技術(shù)路線
    1 有待研究的問題
    2 研究目的
    3 研究意義
    4 技術(shù)路線
第三章 試驗研究
    試驗一 維生素D_3對感染輪狀病毒豬腸道自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路基因表達的影響
        1. 材料與方法
            1.1 輪狀病毒
            1.2 試驗設(shè)計及試驗動物
            1.3 試驗日糧
            1.4 飼養(yǎng)管理
            1.5 樣品采集
            1.6 考察指標及測定方法
            1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 腸道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑相關(guān)基因相對表達量
            2.2 腸道自噬通路相關(guān)基因相對表達量
        3 討論
        4 小結(jié)
    試驗二 維生素D_3通過自噬或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激路徑緩解輪狀病毒對IPEC-J2細胞的感染作用
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試驗試劑及儀器
            1.3 試驗方法
                1.3.1 IPEC-J2細胞復(fù)蘇
                1.3.2 IPEC-J2細胞系常規(guī)培養(yǎng)
                1.3.3 OUS株輪狀病毒的培養(yǎng)
        2 試驗內(nèi)容
            2.1 試驗1 輪狀病毒感染劑量的篩選
                2.1.1 試驗?zāi)康?br>                2.1.2 試驗設(shè)計
                2.1.3 細胞處理
                2.1.4 考察指標及測定方法
                2.1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
                2.1.6 結(jié)果與分析
                2.1.7 討論
                2.1.8 小結(jié)
            2.2 試驗2 細胞輪狀病毒感染條件下適宜維生素D_3添加濃度篩選
                2.2.1 試驗?zāi)康?br>                2.2.2 試驗設(shè)計
                2.2.3 細胞處理
                2.2.4 樣品收集
                2.2.5 考察指標及測定方法
                2.2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
                2.2.7 結(jié)果與分析
                2.2.8 討論
                2.2.9 小結(jié)
            2.3 試驗3 VD_3對感染輪狀病毒IPEC-J2細胞ERS路徑的影響
                2.3.1 試驗?zāi)康?br>                2.3.2 試驗設(shè)計
                2.3.3 細胞處理
                2.3.4 樣品收集
                2.3.5 考察指標及測定方法
                2.3.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
                2.3.7 結(jié)果與分析
                2.3.8 討論
                2.3.9 小結(jié)
            2.4 試驗4 VD_3對感染輪狀病毒IPEC-J2細胞自噬路徑的影響
                2.4.1 試驗?zāi)康?br>                2.4.2 試驗設(shè)計
                2.4.3 細胞處理
                2.4.4 樣品收集
                2.4.5 考察指標及測定方法
                2.4.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
                2.4.7 結(jié)果與分析
                2.4.8 討論
                2.4.9 小結(jié)
全文總體討論、結(jié)論及有待進一步研究的問題
    1 總體討論
    2 全文結(jié)論
    3 有待進一步研究的問題
附錄
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
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本文編號：3505937