十二指腸賈第蟲內(nèi)源性CAS9基因啟動子的篩選及瞬時表達
發(fā)布時間:2021-11-19 22:07
賈第蟲。℅iardiasis)是由寄生于十二指腸的賈第蟲(Giardia spp.)引起的以腹瀉為主要癥狀的人獸共患原蟲病。宿主感染賈第蟲后因自身免疫能力的差異表現(xiàn)出不同癥狀。其中免疫正常的宿主多產(chǎn)生自限性腹瀉,而免疫力低下的宿主尤其艾滋病患者則產(chǎn)生脫水性腹瀉,嚴重者危及生命。該病呈世界性分布,感染性極強,宿主僅攝入10個左右的感染性包囊即可引發(fā)感染,因此賈第蟲也被WHO列為首要容易忽視的病原體。賈第蟲是較為古老的低等真核生物,其具有獨特的細胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)(如存在外周囊泡和缺乏線粒體、典型的高爾基體及過氧化物酶類等),然而在增殖方面,賈第蟲卻仍然保留著原核生物的二分裂方式,生活史較為簡單,僅分為滋養(yǎng)體和包囊兩個階段,使其成為研究高等真核生物細胞或其它寄生蟲細胞分化和分子機理的重要模式生物。研究賈第蟲的分子機理需對其進行基因操作,對賈第蟲的基因組進行編輯有利于我們了解各基因的功能,為闡明該病原的致病機理和毒力因素提供理論基礎(chǔ),同時也為研究治療賈第蟲病提供新的藥物靶點。近年來,CRISPR-CAS9基因編輯系統(tǒng)被發(fā)現(xiàn)并在生命科學(xué)各領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用,其快速有效的靶基因編輯體系是以CAS9蛋白...
【文章來源】:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:56 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
賈第蟲生活史Fig.1-1ThelifecycleofGiardia
CRISPR-CAS9構(gòu)成圖
5圖 1-3 三種 CAS 基因工作原理示意圖(引用自 Hsu, P. D., et al. Cell 2014, 157(6): 1262-1278.)Fig. 1-3 The working principle diagram of three types of CAS gene (Quote from Hsu, P. D., et al. Cell2014, 157(6): 1262-1278.)1.3.3 CRISPR-CAS9 基因編輯技術(shù)的優(yōu)勢與 ZFNs 和 TALENs 兩種基因編輯技術(shù)相比,CRISPR-CAS9 技術(shù)不需要設(shè)計過于復(fù)雜的核酸酶結(jié)構(gòu),僅需要將 CRISPR-CAS9 與基因工程載體連接構(gòu)建成能夠表達 CAS9 蛋白的特異性載體,同時設(shè)計靶基因的 gRNA 列,將上述載體轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)就可以進行基因編輯。另外還可以設(shè)計多個gRNA 共同轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)實現(xiàn)基因的多靶點敲除[55]。針對不同的靶序列也無需重新構(gòu)建載體,僅需
【參考文獻】:
期刊論文
[1]真核啟動子研究進展[J]. 湯方,涂慧珍. 林業(yè)科技開發(fā). 2015(02)
本文編號:3505965
【文章來源】:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:56 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
賈第蟲生活史Fig.1-1ThelifecycleofGiardia
CRISPR-CAS9構(gòu)成圖
5圖 1-3 三種 CAS 基因工作原理示意圖(引用自 Hsu, P. D., et al. Cell 2014, 157(6): 1262-1278.)Fig. 1-3 The working principle diagram of three types of CAS gene (Quote from Hsu, P. D., et al. Cell2014, 157(6): 1262-1278.)1.3.3 CRISPR-CAS9 基因編輯技術(shù)的優(yōu)勢與 ZFNs 和 TALENs 兩種基因編輯技術(shù)相比,CRISPR-CAS9 技術(shù)不需要設(shè)計過于復(fù)雜的核酸酶結(jié)構(gòu),僅需要將 CRISPR-CAS9 與基因工程載體連接構(gòu)建成能夠表達 CAS9 蛋白的特異性載體,同時設(shè)計靶基因的 gRNA 列,將上述載體轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)就可以進行基因編輯。另外還可以設(shè)計多個gRNA 共同轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)實現(xiàn)基因的多靶點敲除[55]。針對不同的靶序列也無需重新構(gòu)建載體,僅需
【參考文獻】:
期刊論文
[1]真核啟動子研究進展[J]. 湯方,涂慧珍. 林業(yè)科技開發(fā). 2015(02)
本文編號:3505965
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