褪黑激素主要由松果體產(chǎn)生,是一種神經(jīng)內(nèi)分泌信號,對絨山羊進行褪黑激素處理,可誘導絨山羊絨毛生長,提高產(chǎn)絨量。本研究基于課題組前期獲得的內(nèi)蒙古絨山羊皮膚組織埋植褪黑激素組與對照組8月、9月、12月、2月的轉錄組數(shù)據(jù),選取表達差異顯著的RORα、FGF21作為候選基因,通過熒光定量PCR技術和Western blot技術,分析RORα、FGF21基因在內(nèi)蒙古絨山羊皮膚組織中mRNA水平和蛋白水平上的表達,為進一步探索褪黑激素促進絨毛生長機理提供理論依據(jù),主要研究結果如下:1.選取內(nèi)蒙古絨山羊母羊12只,隨機分成兩組,每組6只,一組埋植褪黑激素,作為實驗組,另外一組作為對照組。連續(xù)采集12個月絨山羊肩胛骨體側皮膚組織,利用實時熒光定量PCR檢測RORα、FGF21基因的表達情況,結果表明:RORα基因除4月和8月份外,其他月份實驗組均與對照組有顯著性差異（P＜0.05）,其中實驗組11月、1月、2月極顯著高于對照組（P＜0.01）。實驗組FGF21基因在11月、1月、2月份表達量顯著高于對照組（P＜0.05）,在7月份表達量顯著低于對照組（P＜0.05）。2.從采集的皮膚組織樣品中選取8月、... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１實驗研究的技術路線??Ｆｉｇ．?１?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏｕｔｅ?ｏｆ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｓｔｕｄｉｅｓ??

１４?褪黑激素對內(nèi)蒙古滅山羊皮膚毛囊中ＲＯＲｃｕ?ＦＧＦ２１基因表達的影響??表３?ＲＴ－ｑＰＣＲ反應體系??Ｔａｂｌｅ．３?ｒｔ－ｑｐｃｒ?Ｒｅｓｐｏｎｓｅ?Ｓｙｓｔｅｍ??成分?用量（ｕｌ）???ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭ?ＩＩ?１０．０??ＲｏｘｒｅｆｅｒｅｎｃｅＤｙｅ?ＩＩ?０．４??ＦｏｒｗａｒｄＰｒｉｍｅｒ?０．８??ＲｅｖｅｒｓｅＰｒｉｍｅｒ?０．８??ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅｄｄＨ２〇?６??ｃＤＮＡ?２．０??ＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅ?２０??反應體系：預變性階段為９５°Ｃ３０ｓ，變性階段為９５°Ｃ５ｓ，退火溫度參??照表２，時間為３０ｓ，共４０個循環(huán)。用１．５％的瓊脂糖凝膠電泳檢測熒光定??量ＰＣＲ產(chǎn)物。??３．２．６數(shù)據(jù)分析??采用２＿ＡＡｅｔ法對所得數(shù)據(jù)進行相對定量分析，以少為內(nèi)參基因，??利用ｓｐｓｓ軟件進行不同組不同月份顯著性檢驗。??３．２．７結果與分析??３．２．７．１總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳檢測結果??用１％的瓊脂糖凝膠電泳檢測所提�。遥危翗悠返臈l帶，發(fā)現(xiàn)５Ｓ、１８Ｓ??和２８Ｓ條帶清晰、完整性良好，可進行后續(xù)實驗。??—ｓ??圖２?皮膚總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳檢測結果??Ｆｉｇ．２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｓｋｉｎ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??

２２?褪黑激素對內(nèi)蒙古絨山羊皮膚毛囊中ＲＯＲｃｕ?ＦＧＦ２１基因表達的影響??環(huán)境下孵育過夜�？贵w稀釋濃度：為１：?５０００，ＦＧＦ２／為１：１０００，??尺?為?１：１００。??（６）洗脫??ＴＢＳＴ充分洗滌ＰＶＤＦ膜５－６次，５ｍｉｎ／次。??（７）二抗孵育??將ＰＶＤＦ膜浸泡于已經(jīng)稀釋好的二抗中，３７°Ｃ搖床孵育２ｈ，二抗的稀??釋濃度按１：５００００稀釋??（８）洗脫??ＴＢＳＴ充分洗滌ＰＶＤＦ膜５次，５ｍｉｎ／次。??（９）掃膜??用掃描儀中的ＩｍａｇｅＳｔｕｄｉｏＶｅｒ２．１軟件掃描分析膠片。??（１０）統(tǒng)計分析方法??應用ｓｐｓｓ統(tǒng)計軟件采用單因素方差分析的方式分析皮膚蛋白中的??ＲＯＲａ、ＦＧＦ２１蛋白。相對表達量＝目的蛋白的灰度值／內(nèi)參的灰度值。??４．３?結果與分析??４．３．１?標準曲線??從圖中可看出此為皮膚樣品蛋白濃度的標準曲線，其回歸方程和相關??系數(shù)分別為ｙ＝０．５６４５ｘ＋０．０３５，Ｒ２＝０．９９６６，說明測得的濃度可靠性高，可??進行后續(xù)實驗。??０．７－｜??０．６－?＞??０．５－??°＊３＇?ｙ?＝?０．?５６４５ｘ?＋?０．?０３５??皮＝０．?９９６６??。２?＾??０．１?－??Ｑ?－ｊ?］?｜?｜?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?０．?２?０．４?０．６?０．８?１?１．２??圖８?蛋白標準品的標準曲線??Ｆｉｇ．８?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｓｔａｎｄａｒｄ??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3505933