發(fā)布時間：2021-11-17 20:50

　　流感即流行性感冒,是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染性疾病。流感病毒屬于正黏科病毒,可分為甲、乙、丙三種類型。甲型H3N2流感病毒是最常見的季節(jié)性流感病毒,也是目前多價流感疫苗中主要組成部分。流感疫苗以雞胚培養(yǎng)法生產(chǎn)的傳統(tǒng)疫苗為主,這種傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝雖然成熟,但存在產(chǎn)量不穩(wěn)定、生產(chǎn)周期長、病毒易變異、易引起過敏反應(yīng)等缺點。相對于雞胚,生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗工藝生產(chǎn)過程操作簡單且易于控制,生產(chǎn)周期短,自動化程度高,疫苗質(zhì)量穩(wěn)定、安全,具有絕對優(yōu)勢。而MDCK細(xì)胞為目前公認(rèn)的對流感病毒敏感的細(xì)胞株之一。本研究將甘肅省動物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心保存的MDCK細(xì)胞,按照《中華人民共和國藥典》（三部）對生產(chǎn)疫苗用細(xì)胞要求,從生物學(xué)特性、微生物污染和遺傳特性鑒定建立MDCK細(xì)胞庫,其復(fù)蘇活力為96%,培養(yǎng)48h細(xì)胞生長致密單層,形態(tài)多呈三角形和不規(guī)則多角形,與凍存前的形態(tài)基本一致;生長曲線呈“S”型,最大增殖密度為5.45×10⁵cells/mL,倍增時間為23.2h,連續(xù)培養(yǎng)10代時形態(tài)和生長速度保持一致;真菌、細(xì)菌、支原體和內(nèi)、外源病毒因子檢測為陰性;染色體眾... 

【文章來源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

甲型流感病毒的結(jié)構(gòu)示意圖

疽饌糩97]Fig1-1 Structure of the influenza virus3.3 甲型流感病毒在宿主細(xì)胞中的增殖過程甲型流感病毒在宿主細(xì)胞中的增殖到成熟過程可以分為以下幾個步驟（圖1-2）：(1)病毒吸附：病毒 HA 經(jīng)蛋白酶水解活化后識別宿主細(xì)胞表面的唾液酸-α-2, 6-半乳糖(SA-α-2, 6-GaL)受體并與之結(jié)合，病毒吸附于宿主細(xì)胞表面[98]；(2)脫衣殼：病毒吸附于宿主細(xì)胞表面后，通過受體－配體介導(dǎo)的網(wǎng)格蛋白依賴性胞吞作用穿過細(xì)胞膜，病毒粒被吞入飲泡，飲泡膜與溶酶體融合后，激活M2 離子通道，使 H+進(jìn)入飲泡，導(dǎo)致飲泡中的 pH 迅速降至 5.0 左右，飲泡中這種極酸性環(huán)境使固定在病毒的 M1 蛋白上的 vRNPs 釋放到宿主細(xì)胞質(zhì)中，病毒脫去衣殼；(3)病毒 RNA 的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制：病毒的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程只有在 vRNPs 進(jìn)入細(xì)胞和后才開始[99]。因此 NP 蛋白引導(dǎo)宿主細(xì)胞質(zhì)中的 vRNPs 通過核孔至細(xì)胞核內(nèi)時，RdRp 催化病毒 RNA 開始轉(zhuǎn)錄和復(fù)制

圖 2-1 MDCK 細(xì)胞形態(tài)(48h,10×)A：復(fù)蘇后細(xì)胞形態(tài) B：傳代后細(xì)胞形態(tài)Figure 2-1 The morphology of MDCK cells (48h,10×)A:The morphologyafter resuscitation B:The morphologyafter passg

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的關(guān)鍵控制點探究[D]. 彭雯娟.華東理工大學(xué) 2017
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[3]用于流感疫苗生產(chǎn)的MDCK懸浮細(xì)胞流加培養(yǎng)工藝的開發(fā)[D]. 賈涵婧.華東理工大學(xué) 2015
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本文編號：3501623