我國是養(yǎng)牛大國，但由于多種傳染病的影響，嚴(yán)重制約了養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，如：奶牛乳腺炎、口蹄疫、牛病毒性腹瀉等。研究表明，重組牛干擾素（boIFN-）在體外具有抗水皰性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹瀉病毒等多種病毒的作用。干擾素廣泛的抗病毒和多種免疫調(diào)節(jié)功能，使干擾素對重大傳染病具有一定的預(yù)防和控制作用。高效表達(dá)高活性的boIFN-將有利于疾病的預(yù)防和控制。巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)作為一種成熟的真核表達(dá)工具，已成功高效分泌表達(dá)多種蛋白，本研究采用畢赤酵母高效分泌表達(dá)牛干擾素并進(jìn)行活性分析研究，為牛干擾素的大規(guī)模應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，為牛常見疾病的預(yù)防和控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究首先對boIFN-基因進(jìn)行優(yōu)化，主要通過密碼子偏嗜性優(yōu)化，G+C含量調(diào)整，AT富含區(qū)調(diào)整等幾個方面。將優(yōu)化后的opti-boIFN-基因克隆于畢赤酵母專用分泌型表達(dá)載體pPIC9K，構(gòu)建重組質(zhì)粒pPIC9K-opti-boIFN-，電轉(zhuǎn)畢赤酵母感受態(tài)GS115，通過MD板（營養(yǎng)缺陷型）和不同濃度的YPD-G418板篩選陽性克隆進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，取誘導(dǎo)上清SDS-PAGE電泳、western blot分析。同時采用單因素實(shí)驗(yàn)方法，分... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

boIFN-基因密碼子使用分析

畢赤酵母密碼子使用分析

優(yōu)化后基因與原基因序列比對Fig1.3Nucleotidesequencealignmentbetweenopti-boIFN-andorig-boIFN-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牛γ干擾素的表達(dá)及其抗病毒活性測定[J]. 徐正中,陳祥,單鋒麗,孟闖,孫林,黃金林,潘志明,耿士忠,焦新安.  生物工程學(xué)報. 2011(02)
[2]牛α干擾素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效穩(wěn)定表達(dá)及抗病毒活性檢測[J]. 葛金英,丁玉林,解希帝,曹有才,劉娣,步志高.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(09)
[3]牛γ-干擾素在重組桿狀病毒中的表達(dá)及其抗病毒活性的測定[J]. 秦立廷,王喜軍,胡森,劉思當(dāng),步志高,李志中,陳偉業(yè),葛金英.  微生物學(xué)報. 2007(03)

博士論文
[1]重組牛、豬和雞β干擾素在CHO細(xì)胞中的高效穩(wěn)定表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[D]. 陳偉業(yè).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3501626