細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶5（CDK5）是一種脯氨酸指導(dǎo)的絲氛酸/蘇氨酸激酶,已被證明在神經(jīng)系統(tǒng)外的許多組織中發(fā)揮重要作用。前期研究發(fā)現(xiàn),CDK5在不同毛色的羊駝皮膚轉(zhuǎn)錄組圖譜中呈差異表達(dá),并且CDK5敲減小鼠毛色表型發(fā)生了變化。為了深入研究CDK5在毛色形成過(guò)程發(fā)揮功能的分子機(jī)制,本研究應(yīng)用CDK5敲減小鼠模型,驗(yàn)證對(duì)小鼠皮膚中絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）路徑上一些相關(guān)因子的影響。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR,免疫共沉淀和蛋白質(zhì)印跡等方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),結(jié)果如下:1.與野生型小鼠皮膚相比,在敲減CDK5的小鼠皮膚中CDK5的mRNA表達(dá)水平明顯下降（P<0.001）。磷酸化的CDK5的蛋白表達(dá)明顯下降（P<0.001）,而總CDK5的蛋白表達(dá)水平趨勢(shì)不明顯;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示CDK7是CDK5的作用因子,二者存在相互作用,且CDK7mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）。2.在MAPK路徑上,與野生型小鼠皮膚相比,CDK5敲減小鼠的皮膚中MAP3K6的mRNA表達(dá)水平顯著降低（P<0.001）。MAP3K6蛋白主要定位于CDIK5敲減小鼠皮膚表皮基部,且信號(hào)比野生型小... 

【文章來(lái)源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚的表型和ＣＤＩＣ５磷酸化狀態(tài)??（Ａ）?ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚中ＣＤＫ５?ｍＲＮＡ表達(dá)的ＲＴ－ｑＰＣＲ分析

玻牐停粒校常耍對(duì)冢茫模耍登眉跣∈篤し糝械謀澩錚崳?與野生型小鼠皮膚相比，ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚中ＭＡＰ３Ｋ６的ｍＲＮＡ表達(dá)水平顯著??降低８１．０３％?（Ｐ０．００１；圖３Ａ）。ＭＡＰ３Ｋ６主要定位于ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚中表皮細(xì)??胞的基部（圖３Ｂ）?，?ＭＡＰ３Ｋ６蛋白在ＣＤＫ５敲減小鼠與野生型小鼠蛋白水平顯著降低??了?７５．２６％?（Ｐ０．００１；圖?３Ｃ，Ｄ）。??Ａ?Ｂ??１Ｖ１ＡＰ３Ｋ６?Ｎｏ?Ｉｓ，Ａｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ??１．５ｎ??Ｉ?￡?，??Ｗ＞?－??Ｗ）?＂３??２？?＝?？，??ｉＷＪｍ??°－５－??－〇，Ｌ＿ｉ＾?Ｈ?－??Ｗｉｌｄ?（ｖｐｅ?ＣＤＫ５?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｍｉｃｅ??Ｃ?？??１．５－１??ＭＡＰ３Ｋ６?夢(mèng)讀?＞?＇＇ｇ??ｐ－ａｃｔｉｎ?含?１?〇－??Ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ?（?〇Ｋ５?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｍｉｃｅ?２?＂ｇ??〇?＾?｜ｒ？＾??＞?５１?０．５－?ｐｔｔｉｆｔｉＰ??５?Ｓ?？ｋ＾＇ｋ??次。ＬＢ＿＿＿ｍ＿??Ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ?ＣＤＫ５?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ??圖３?ＭＡＰ３Ｋ６在ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚中的表達(dá)??（Ａ）?ＣＤＫ５敲減和野生型小鼠皮膚中ＭＡＰ３Ｋ６?ｍＲＮＡ表達(dá)的ＲＴ－ｑＰＣＲ分析。（Ｂ）?ＣＤＫ５敲減和??野生型小鼠皮膚切片中ＭＡＰ３Ｋ６的免疫組織學(xué)染色。（Ｃ）ＣＤＫ５敲減和野生型小鼠皮膚中ＭＡＰ３Ｋ６??蛋白表達(dá)的Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析。（Ｄ）

常?常牐茫模耍吩冢茫模耍登眉跣∈篤し糝械謀澩錚崳?ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示相對(duì)于野，Ｉ－：型小鼠皮膚ＣＤＫ７?ｍＲＮＡ表達(dá)水平顯著降低了??４８．２５％?（Ｐ＜０．０１；圖４Ａ）。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示了?ＣＤＫ５與ＣＤＫ７之間具有相互關(guān)系??（圖４Ｂ）。ＣＤＫ７蛋白在敲減ＣＤＫ５小鼠相對(duì)于野生型皮膚中降低４０．１６％?（Ｐ＜０．０１；??圖?４Ｃ，?Ｄ）。??Ａ?＿?１．５－１?Ｂ??？｜?＾?１０＂?■ｍｇ?ＩｇＧ?Ｓｕｐｅｒａｎａｔ?Ｃｃｌｌ＾ｉｔｅ??２?Ｚ?１Ｐ：ＣＤＫ５?ｌ?：：?＇?＇?．翁、、．．一—??ｌ｜０＇５－?Ｈ?ｄｌｌ?ＷＢ：ＣＤＫ７??■?■?＿??－０．０ｉ＿ＪＨＰＨ?ＷＢ：?ＣＤＫ５??Ｗｉｌｄ?ｔ＼ｐｅ?ＣＤＫ５?ｋｏｃｋｄｏｗｎ?ｍｉｃｅ??Ｃ?Ｄ?ｉ?１５ｉ??①??ｒ－ｎ－一－ｒ￣＾ｒ?—ｒｒ￣；??ｒｒｎ?１?ｎ????ＣＤＫ７｜｜ｉ＾?Ｈ＞？?ｍｍ?＾?ｇ?１０＿?￣；、??Ｐ－ａｃｔｉ＂?．＿丨＿麟—ｗｉ＿?麵瞻?麵＿＿＿＿｜“?２?＊＊??Ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ?ＣＤＫ５?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｍｉｃｅ?室?０?５－?胸観■?３丨?Ｎ?卜、??ｉ?〇．〇?—??Ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ?ＣＤＫ５?ｋｏｃｋｄｏｗｎ?ｍｉｃｅ??圖４?ＣＤＫ７在ＣＤＫ５敲減小鼠皮膚中ｍＲＮＡ和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響??（Ａ）?ＣＤＫ７在ＣＤＫ５高５減小鼠皮膚中ｍＲＮＡ表達(dá)的影響。（Ｂ）小鼠皮膚中ＣＤＫ５和ＣＤＫ７之間相??互作用的共免疫沉淀分析。（Ｃ）?ＣＤＫ７蛋白表達(dá)的Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析在ＣＤＫ５敲減和野生型小鼠的??皮膚中。（Ｄ）使用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PKCδ Regulates Cortical Radial Migration by Stabilizing the Cdk5 Activator P35[J].   Science Foundation in China. 2009(02)



本文編號(hào)：3488005