α-半乳糖苷酶是一類可以催化水解含有α-半乳糖苷鍵物質的酶類,因此被應用在飼料、食品等領域用來降解α-半乳糖苷類抗營養(yǎng)因子,該酶廣泛地分布在植物,動物和微生物中,現(xiàn)已篩選出不少產α-半乳糖苷酶活性高的微生物菌株,并進行了廣泛深入的研究。本論文從多種食用菌的子實體中檢測到α-半乳糖苷酶,以高活性的α-半乳糖苷酶的食用菌的子實體和發(fā)酵液作為研究對象,提取出子實體和發(fā)酵液中的α-半乳糖苷酶,并研究其酶學性質及對寡糖類物質的降解效果,同時研究具有α-半乳糖苷酶活性的菌糠作為飼料的可行性。論文的主要研究結果如下:綜合運用各種純化手段,從雞樅菌子實體中提純一種α-半乳糖苷酶,該酶是一種分子量為72 kDa的單亞基蛋白,純化倍數(shù)為146倍,比活為3135 U/mg。該酶作用底物pNPG的最適pH為5.0,在酸性條件下穩(wěn)定性好,最適反應溫度為60℃,較耐熱,在60℃下孵育2小時,相對酶活保持在90%以上。重金屬離子Cd2+和Hg2+對酶活性有強烈的抑制作用,化學修飾劑NBS的修飾結果表明色氨酸（Tryptophan）是該酶活性中心的必需基團。通過薄層色譜和DNS法檢測雞樅菌α-半乳糖苷酶對棉籽糖類家族... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１對硝基酚Ａ?４０５?ｎｍ的標準曲線??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｔａｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ／７－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎａｌ?Ａ?４０５?ｎｍ??

２．３．２．２雞樅菌ａ－半乳糖苷酶粗樣品的ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陰離子交換層析（ｐＨ?７＿２）??雞樅菌粗樣品經過ＤＥＡＥ－Ｃｄｌｕｌｏｓｅ洗脫后，得到Ｄｌ，Ｄ２，?Ｄ３三個洗脫峰，其中ａ－半乳糖??苷酶高度集中在Ｄ２組分中，洗脫峰和活性峰見圖２－３。雞楸菌ａ－半乳糖苷酶可以牢固的吸附在??ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陰離子柱上，緩沖液的沖洗可以去除大量的雜蛋白（Ｄ１組分），１００?ｍＭＮａＣＩ濃??度下可以將大部分活性組分解析下來（Ｄ２組分），５００?ｍＭ?ＮａＣｌ濃度洗脫的Ｄ３組分也含有少量??的活性，忽略不計。??ｌ／ｍｌ．??？?ｎ?－＾Ａ２８（＇ｎｍ?１００?ｍＭＮａＣＩ?「１２〇??ｒｐ??—Ｕ／ｍＬ??■ｒ??１．６?ｊ?Ｄ１?５００?ｎ，Ｍ?＇?１〇０??ｙＮａＣＩ?１）３??崖??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?１４０??Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｖｏｌｕｍｅ?（ｍｌｖ）??圖２－３雞樅菌ｏｔ－半乳糖苷酶粗樣品的ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陰離子交換層析洗脫曲線（ｐＨ?７．２）??上樣的樣品為透析后的粗酶樣品。層析的流速為１．０ｍＬ／ｍｉｎ。黑色曲線為蛋白含量洗脫曲線，紅色曲線為活性洗??脫曲線，由圖看出半乳糖苷酶的活性存在于Ｄ２組分中。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｎｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｎ?ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?ｃｏｌｕｍｎ?（ｐＨ?７．２）．??Ｓａｍｐｌｅ：?Ｃｒｕｄｅ?ａ－ｇａｌａｃｔｏｄｉａｓｅ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆｒｏｍ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ｏｆ?Ｔｅｎｎｉｔｏｍｙｃｅｓ?ａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ．?Ｆ

２．３．２．３?ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?陽離子交換層析（ｐＨ?３．６）??Ｄ２活性組分在去離子水中充分透析，通過ＣＭ－Ｃｅｌｌｕ丨ｏｓｅ陽離子交換層析洗脫，得到三個洗??脫峰ＣＭ１，?ＣＭ２，?ＣＭ３，?ａ－半乳糖苷酶活性集中在ＣＭ２組分中，見圖２－４。洗脫峰ＣＭ１和ＣＭ３??中均含有大量的雜蛋白。??１／ｍＬ??０．５?１?「７０??Ｂｕｆｆｅｒ?ＣＶＩＩ?５０?ｍＭ?ＮａＣＩ?ＣＭ２?—〇—?＼?＂＞８０?ｎｍ??ｎ?蠱?－６０??（丨４?１?—Ｕ／ｍＬ??－５０??Ｉ０＇３＇??ｇ?１?Ｉ?３００?ｍ．Ｍ?ＮａＣＩ?ＣＭ３?４０??〇?ｉｏｏ＾?１??１?—＾ｏｃｋ＞－?■?ｕ〇〇Ｑ〇ａ￥?ｉ〇??０?３０?６０?９０?１２０?１５０?１８０??Ｅｌｕｔｉｏｎ?ｖｏｌｕｍｅ?（ｍＬ）??圖２－４雞極菌ａ－半乳糖苷酶Ｄ２組分的ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陽離子交換層析（ｐＨ?３．６〉??上樣樣品為透析后的Ｄ２組分，層析流速為１．０?ｍＬ／ｍｉｎ，黑色曲線為蛋白含量洗脫曲線，紅色曲線為活性曲線，??活性組分在ＣＭ２峰中。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｄ２?ｏｎ?ＣＩＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ?ｃｏｌｕｍｎ?（ｐＨ?３．６）．??Ｓａｍｐｌｅ：Ｄ２．?Ｆｌｏｗ?ｒａｔｅ：?１．０?ｍＬ／ｍｉｎ．?Ｂｌａｃｋ?ｃｕｒｖｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ａ

【參考文獻】：
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本文編號：3484019