胎盤發(fā)育異常是目前公認(rèn)的導(dǎo)致克隆牛體內(nèi)發(fā)育失敗的主要原因,而越來越多的證據(jù)表明在囊胚階段滋養(yǎng)層和內(nèi)細(xì)胞分化異常是引起胎盤發(fā)育異常的關(guān)鍵因素。哺乳動物的早期胚胎第一次細(xì)胞分化過程極其復(fù)雜,受到多種調(diào)控因子的影響,其中MCRS1、CDX2、NANOG在胚胎發(fā)育過程中起著十分重要的作用。MCRS1主要參與細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化;CDX2在胚胎發(fā)育過程中的主要作用是維持胚胎生長、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和器官的形成;NANOG基因?qū)υ缙谂咛ブ信咛ジ杉?xì)胞的自我更新以及維持細(xì)胞多潛能性發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用,其被認(rèn)為是全能型或者多能性干細(xì)胞的重要標(biāo)志物。截止目前,有關(guān)MCRS1、CDX2和NANOG在體外受精（In vitro fertilization,IVF）以及核移植囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ICM）和滋養(yǎng)層（TE）細(xì)胞的表達(dá)模式和作用的研究尚不夠完善,主要原因是囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞不易完全分離開來進(jìn)行針對性的檢測分析。本研究通過體外受精和核移植技術(shù)獲得IVF和核移植囊胚,然后通過磁珠分選的方法分離純化囊胚的ICM和TE細(xì)胞;進(jìn)一步運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)研究兩種囊胚的ICM和TE細(xì)胞中MCRS1、CDX2和NANOG的... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

磁珠分選后得到的ICM和TE細(xì)胞左列為ICM細(xì)胞，右列為TE細(xì)胞，第一行為Hoechst33342染色，第二行為ConA-FITC染色，第三行為merged圖像

圖 3-1 MCRS1 在牛 IVF 囊胚的 ICM 和 TE 細(xì)胞中的相對表達(dá)量a.b 表示組間具有顯著性差異（P<0.05）Fig. 3-1 Relative expression levels of MCRS1 in ICM and TE cells of cow IVF blastocyst. Differeletters indicate differences (P < 0.05) CDX2 在 IVF 囊胚 ICM 和 TE 細(xì)胞中的表達(dá)情況以相同的方法得到的 IVF 囊胚中的 ICM 和 TE 細(xì)胞，利用熒光定量 PCR 的方法定了CDX2 在IVF 囊胚ICM 和 TE 細(xì)胞中的表達(dá)情況。經(jīng)過數(shù)據(jù)處理與分析，CD果如圖 3-2 所示，CDX2 在牛 IVF 囊胚的 TE 細(xì)胞中的相對表達(dá)量顯著高于在 IC的相對表達(dá)量（P<0.05）。

圖 3-2 CDX2 在牛 IVF 囊胚的 ICM 和 TE 細(xì)胞中的相對表達(dá)量a.b 表示組間具有顯著性差異（P<0.05）Fig. 3-2 Relative expression levels of CDX2 in ICM and TE cells of cow IVF blastocyst. Differentletters indicate differences (P < 0.05).2 NANOG 在 IVF 囊胚 ICM 和 TE 細(xì)胞中的表達(dá)情況對 IVF 囊胚進(jìn)行磁珠分選得到 IVF 囊胚中的 ICM 和 TE 細(xì)胞，然后通過實(shí)時(shí)熒光 PCR 的方法，分別測定了 NANOG 在 IVF 囊胚 ICM 和 TE 細(xì)胞中的表達(dá)水平。經(jīng)據(jù)處理和分析，結(jié)果如圖 3-3 所示，NANOG 主要在囊胚的 ICM 中表達(dá)，在 TE中的相對表達(dá)量較低，且在 ICM 中的相對表達(dá)量顯著高于在 TE 細(xì)胞中的表達(dá)量<0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3475850