益生菌通過抑制或增強對細胞因子表達的調節(jié)影響腸道免疫反應。研究表明，口服嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus SW1（LASW1）具有免疫增強作用，能增強病毒特異性免疫反應，動物以口服方式攝取該菌株后，能夠調節(jié)體內細胞因子的表達水平。在本研究中，首先評估了LASW1對健康BALB/c小鼠全身性免疫反應的影響。結果表明飼喂LASW1后，與對照組相比，小鼠體內腫瘤壞死因子（TNF-α）的表達受到顯著抑制，而Th1型細胞因子，包括干擾素-gamma（IFN-γ）和白細胞介素12（IL-12）的表達明顯升高。實驗還發(fā)現，口服LASW1后，小鼠體內轉化生長因子（TGF-β）的水平也明顯升高。此外，高劑量LASW1與低劑量LASW1分別飼喂小鼠，與對照組相比，外周血中CD3+CD4+和CD3+CD8+T細胞數量隨之降低。同時發(fā)現，小鼠血清中免疫球蛋白的濃度也發(fā)生了明顯的變化，并且這種變化呈菌株劑量依賴性。與體內試驗相比，熱致死型（heat-killed，HK）LASW1（HKLASW1）能誘導脾臟細胞大量分泌TNF-a，而細菌培養(yǎng)上清液（La-sup）能強烈的抑制HKLAS... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：85 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 前言
    1.2 乳酸菌的分類及理化特性
    1.4 乳酸菌與免疫系統(tǒng)
        1.4.1 乳酸菌的免疫識別
        1.4.2 乳酸菌的 TLR2 信號通路
        1.4.3 TLR9 對乳酸菌基因組 DNA 的識別
        1.4.4 肽聚糖識別性免疫信號通路
        1.4.5 細菌多糖對免疫信號的影響
        1.4.6 乳酸菌的體外免疫調節(jié)
        1.4.7 發(fā)現乳酸菌免疫調節(jié)成分的新方法
        1.4.8 體內免疫調節(jié)機制
        1.4.9 乳酸菌對抗體反應及免疫力的影響
        1.4.10 先天性免疫信號的傳遞及物理屏障功能
    1.5 研究的目的與意義
第二章 鼠源乳酸菌的分離與鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗小鼠和培養(yǎng)基
        2.2.2 分離腸道乳酸菌
        2.2.3 革蘭氏染色
        2.2.4 細菌 16SrDNA 基因的擴增與測序鑒定
        2.2.5 不同乳酸菌 16SrDNA 基因的變異圖譜
    2.3 結果
        2.3.1 革蘭氏染色結果
        2.3.2 乳酸菌 16S 基因變異
    2.4 結論
第三章 酸乳菌對小鼠細胞因子分泌的影響
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 口服嗜酸乳桿菌的制備
        3.2.2 熱致死 LASW1 的制備
        3.2.3 實驗分組
        3.2.4 細胞因子的檢測
        3.2.5 外周血細胞中 T 淋巴細胞檢測
        3.2.6 流式細胞技術檢測血清免疫球蛋白亞型含量
        3.2.7 脾臟細胞的制備及其與熱致死 LASW1 的共培養(yǎng)
        3.2.8 淋巴細胞增殖實驗
        3.2.9 嗜酸乳桿菌刺激脾臟淋巴細胞后調節(jié)性 T 細胞比例的分析
        3.2.10 結果統(tǒng)計與分析
    3.4 實驗結果
        3.4.1 口服 LASW1 抑制體內 TNF-α的產生，增加 Th1 型細胞因子反應22
        3.4.2 口服 LASW1 對小鼠外周血 T 淋巴細胞亞群的影響
        3.4.3 血清中免疫球蛋白亞型濃度
        3.4.4 HK LASW1 誘導小鼠脾臟細胞分泌細胞因子
        3.4.5 LASW1 影響淋巴細胞增殖
        3.4.6 嗜酸乳桿菌增加調節(jié)性 T 細胞的比值
    3.5 討論
第四章 口服 LASW1 對商用口蹄疫滅活苗的免疫調節(jié)作用
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 細菌
        4.2.2 動物及實驗分組
        4.2.3 口蹄疫病毒特異性 IgG 及其亞型測定
        4.2.4 脾細胞增殖實驗
        4.2.5 抗原特異性遲發(fā)型超敏反應（DTH，delayed-type hypersensitivity）
        4.2.6 體內外細胞因子 IFN-γ和 TNF-α水平檢測
        4.2.7 流式細胞術檢測小鼠血清中免疫球蛋白分型變化
        4.2.8 實驗數據的統(tǒng)計分析
    4.3 結果
        4.3.1 口蹄疫特異性 IgG 及其亞型
        4.3.2 脾細胞增殖實驗
        4.3.3 抗原特異性超敏反應
        4.3.4 體內外細胞因子的分泌水平
        4.3.5 免疫球蛋白 Ig 各型含量
    4.4 討論
第五章 乳酸菌對口蹄疫 DNA 疫苗在小鼠體內的佐劑效應
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 表達 FMDV-VP1 基因真核質粒的構建
        5.2.2 真核細胞中表達 VP1 基因
        5.2.3 細菌
        5.2.4 實驗動物和免疫接種
        5.2.5 特異性口蹄疫病毒 IgG 及其亞型的檢測
        5.2.6 脾臟淋巴細胞增殖實驗
        5.2.7 體外細胞因子檢測
        5.2.8 酶聯免疫斑點試驗
        5.2.9 數據統(tǒng)計與分析
    5.3 結果
        5.3.1 BHK-21 細胞中表達 VP1 基因
        5.3.2 嗜酸乳桿菌可改善體液免疫反應
        5.3.3 細胞增殖效應
        5.3.4 細胞因子檢測
        5.3.5 INF-γ的 ELISpot 實驗
    5.4 討論
第六章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Probiotics increase T regulatory cells and reduce severity of experimental colitis in mice[J]. Hai-Mei Zhao,Xiao-Ying Huang,Zhi-Qin Zuo,Qi-Hong Pan,Mei-Ying Ao,Feng Zhou,Hong-Ning Liu,Zhi-Yong Liu,Duan-Yong Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2013(05)
[2]Potentially probiotic bacteria induce efficient maturation but differential cytokine production in human monocyte-derived dendritic cells[J]. Sinikka Latvala,Taija E Pietil,Ville Veckman,Riina A Kekkonen,Soile Tynkkynen,Riitta Korpela,Ilkka Julkunen.  World Journal of Gastroenterology. 2008(36)
[3]Correlation between in vitro and in vivo immunomodulatory properties of lactic acid bacteria[J]. Benoit Foligne,Sophie Nutten,Corinne Grangette,Véronique Dennin,Denise Goudercourt,Sabine Poiret,Joelle Dewulf,Dominique Brassart,Annick Mercenier,Bruno Pot.  World Journal of Gastroenterology. 2007(02)
[4]Preventative effects of a probiotic, Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, in the TNBS model of rat colitis[J]. Laura Peran,Desiree Camuesco,Monica Comalada,Ana Nieto,Angel Concha,Maria Paz Diaz-Ropero,Monica Olivares,Jordi Xaus,Antonio Zarzuelo,Julio Galvez.  World Journal of Gastroenterology. 2005(33)



本文編號：3474717