脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol, DON）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone, ZEA）均是由鐮刀菌產(chǎn)生的霉菌毒素,兩者經(jīng)常同時(shí)出現(xiàn),可在世界范圍內(nèi)污染農(nóng)作物、糧食制品和飼料,進(jìn)而進(jìn)入食物鏈,嚴(yán)重危害人和牲畜的健康。近年來(lái),關(guān)于DON和ZEA的毒性研究多集中在嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞毒性和致癌性等方面,對(duì)禽類免疫毒性的研究較少。本課題通過(guò)對(duì)哈爾濱周邊養(yǎng)雞場(chǎng)飼料中DON和ZEA含量的檢測(cè),分析哈市周邊地區(qū)多種雞飼料二者的污染情況；為了探討DON和ZEA對(duì)雞免疫細(xì)胞的毒性機(jī)制,以55～65日齡健康公雞脾臟制備淋巴細(xì)胞懸浮液,經(jīng)DON（0、0.2、0.8、3.2、12.5和50μg/mL）、ZEA （0、0.1、0.4、1.6、6.25和25μg/mL）以及二者聯(lián)合（DON0、0.0125、0.05、0.2和0.8μg/mL, ZEA0、0.006、0.025.0.1和0.4μg/mL）暴露48h,高效液相色譜方法檢測(cè)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNA總甲基化水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT1、DNMT3A和DNMT3B）、去甲基化酶（MBD2）和炎癥因子（COX-2、NF... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的毒性作用研究進(jìn)展
        1.1.1 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮在國(guó)內(nèi)外污染狀況
        1.1.2 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的免疫毒性研究進(jìn)展
        1.1.3 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的細(xì)胞毒性研究進(jìn)展
        1.1.4 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的其它毒害作用
        1.1.5 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮與氧化應(yīng)激
    1.2 DNA甲基化與疾病研究進(jìn)展
        1.2.1 DNA甲基化與去甲基化
        1.2.2 DNA甲基化與疾病
    1.3 炎癥損傷與免疫性疾病
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 主要儀器與試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
    2.2 檢測(cè)飼料中DON和ZEA的含量
    2.3 淋巴細(xì)胞的提取與處理
    2.4 檢測(cè)基因組DNA總甲基化水平
        2.4.1 DNA樣品處理和色譜條件
        2.4.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.4.3 測(cè)定回收率與精密度
        2.4.4 檢測(cè)DNA甲基化水平
    2.5 DNMTs和MBD2 mRNA的檢測(cè)
        2.5.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.5.2 雞脾淋巴細(xì)胞總RNA的抽提
        2.5.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.5.4 實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增
    2.6 炎癥相關(guān)因子COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA的檢測(cè)
        2.6.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.6.2 雞脾淋巴細(xì)胞總RNA的抽提
        2.6.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.6.4 實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增
    2.7 檢測(cè)抗氧化指標(biāo)
    2.8 檢測(cè)蛋白質(zhì)羰基含量
    2.9 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 飼料中DON和ZEA含量的檢測(cè)結(jié)果
    3.2 HPLC檢測(cè)DNA總甲基化水平結(jié)果
        3.2.1 淋巴細(xì)胞DNA提取結(jié)果
        3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果
        3.2.3 回收率與精密度結(jié)果
        3.2.4 樣品色譜圖
        3.2.5 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)DNA甲基化水平影響的檢測(cè)結(jié)果
    3.3 實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法的建立
    3.4 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.1 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNMT1 mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNMT3A mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.3 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNMT3B mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.4 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞MBD2 mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
    3.5 脾臟淋巴細(xì)胞抗氧化功能的檢測(cè)結(jié)果
        3.5.1 脾淋巴細(xì)胞SOD活性的檢測(cè)結(jié)果
        3.5.2 脾淋巴細(xì)胞GSH-Px活性的檢測(cè)結(jié)果
        3.5.3 脾淋巴細(xì)胞MDA含量的檢測(cè)結(jié)果
    3.6 脾臟淋巴細(xì)胞羰基含量的檢測(cè)結(jié)果
    3.7 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞COX-2、NF-κB、TNF-α、iNOS mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.7.1 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞COX-2 mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.7.2 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞NF-κB mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.7.3 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
        3.7.4 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞iNOS mRNA表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果
4 討論
    4.1 飼料中DON和ZEA毒素檢測(cè)含量的分析
    4.2 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNA總甲基化水平的影響
    4.3 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2基因表達(dá)水平的影響
    4.4 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞抗氧化功能的影響
    4.5 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞蛋白質(zhì)羰基含量的影響
    4.6 DON和ZEA單一及聯(lián)合對(duì)雞脾淋巴細(xì)胞COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA表達(dá)的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TNF-α促進(jìn)HepG2肝細(xì)胞脂質(zhì)積聚及其機(jī)制的初步研究[J]. 陳書(shū)梅,楊淑敏,張文龍,呂瓊,葉鵬,高茹菲,梅玫,汪志紅,李啟富.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(11)
[2]2012年中國(guó)飼料和原料霉菌毒素檢測(cè)報(bào)告[J]. 王金勇,劉穎莉,關(guān)舒.  中國(guó)畜牧雜志. 2013(04)
[3]谷氨酰胺對(duì)肝移植大鼠腸黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表達(dá)的影響[J]. 劉光藝,朱繼芳,李洋.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(12)
[4]HCG聯(lián)合免疫球蛋白對(duì)溴隱亭致大鼠流產(chǎn)模型Th1/Th2型細(xì)胞因子的影響[J]. 董艷,劉福民,劉小云,馮霞.  海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(10)
[5]再談豬場(chǎng)霉菌毒素中毒的防控問(wèn)題[J]. 萬(wàn)遂如.  養(yǎng)豬. 2012(04)
[6]黃曲霉毒素B1誘導(dǎo)性大鼠肝癌超微結(jié)構(gòu)觀察及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶3表達(dá)變化[J]. 張友才,陳金霞,張偉偉,李驥.  中國(guó)癌癥雜志. 2012(01)
[7]miR-222與MBD2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 黃建軍,戈立東,周秀田,謝金龍,胡正超,周波,許威華.  中國(guó)癌癥雜志. 2012(01)
[8]鎘對(duì)甌江彩鯉臟器組織蛋白質(zhì)的氧化損傷作用[J]. 劉曉旭,曹慧,賈秀英.  生態(tài)毒理學(xué)報(bào). 2011(06)
[9]我國(guó)部分地區(qū)2010年產(chǎn)谷物及其制品中多組分真菌毒素污染狀況研究[J]. 馬皎潔,邵兵,林肖惠,于紅霞,李鳳琴.  中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2011(06)
[10]DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b基因在肝外膽管癌組織中的表達(dá)[J]. 左石,鄒聲泉,孫誠(chéng)誼.  貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2011(04)

碩士論文
[1]硒缺乏對(duì)雞組織DNA甲基化水平的影響[D]. 蔣智慧.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]亞慢性錳中毒對(duì)雞腎臟損傷機(jī)制的研究[D]. 顧喜娟.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]土壤中重金屬和農(nóng)藥復(fù)合污染對(duì)蚯蚓毒性效應(yīng)的研究[D]. 邰托婭.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3474776