本文關(guān)鍵詞：茶皂素抗PCV2及其作用機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究茶皂素(tea saponin, TS)對豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的抗病毒作用及其機制,以期為抗病毒新藥的研發(fā)提供依據(jù)。方法：(1)在體外試驗中,首先通過MTT法在PK-15細胞上篩選出TS的最大安全濃度;將100TCID50的PCV2感染PK-15細胞,建立細胞感染模型；分別用15μg/ml、 7.5μg/ml的TS作用于細胞感染模型72h,用熒光定量PCR(qPCR)檢測TS對PCV2 Cap基因表達的影響,計算病毒載量。(2)在動物試驗中,首先通過急性毒性試驗、溶血性檢測和肝、腎組織毒性檢測等體內(nèi)安全性評價試驗確定TS的體內(nèi)給藥劑量;將120只小鼠隨機平均分成5組,每組設4個時間點,5個組分別為空白組、攻毒組、茶皂素給藥組(TS組)、利巴韋林給藥組(Rib組)和茶皂素與利巴韋林混合給藥組(TS+Rib組)。試驗開始第1天,稱重后對攻毒組和給藥組進行攻毒,建立PCV2感染小鼠模型,PCV2的攻毒方式、劑量為每只小鼠腹腔注射0.5 mL、背部皮下多點注射0.3 mL、滴鼻50μl。第7天開始,給藥組按0.2ml/10g稱重后腹腔注射給藥,給藥劑量為：TS組20mg/kgTS溶液,Rib組76mg/kgRib溶液,混合給藥組給予TS和Rib的混合藥液(其中所含TS劑量為20mg/kg,Rib劑量為76mg/kg),攻毒組則給予相應量的生理鹽水。每天給藥1次,連續(xù)給藥5天。分別在攻毒后第10天、13天、16天和19天,取每組中6只小鼠的血清、肝臟等進行檢測。qPCR檢測小鼠肝臟中PCV2 Cap基因拷貝數(shù); Elisa法檢測小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量。結(jié)果：(1)體外試驗中,TS的最大安全濃度為15μg/ml。與PCV2組相比,15μg/mlTS組的PCV2 Cap基因拷貝數(shù)顯著降低(P0.05)。(2)通過體內(nèi)安全性評價試驗確定TS的體內(nèi)給藥劑量為20mg/kg。(3)體內(nèi)試驗中,與攻毒組相比,TS組的PCV2 Cap基因拷貝數(shù)在4個時間點均表現(xiàn)顯著降低(P0.05);脾指數(shù)在4個時間點均表現(xiàn)顯著升高(P0.05);IL-2僅在10d、16d顯著升高(P0.05); IFN-γ在10d、13d和19d顯著升高(P0.05)。TS+Rib組與攻毒組相比,在1Od、13d、19d檢測到PCV2 Cap基因拷貝數(shù)顯著降低(P0.05)；脾指數(shù)在4個時間點均表現(xiàn)顯著升高(P0.05);IL-2僅在10d時顯著升高(P0.05);IFN-γ在4個時間點均顯著升高(P0.05)。結(jié)論：1.15μg/ml的TS在PCV2感染PK-15細胞模型中能夠顯著降低PCV2載量,表現(xiàn)出抗病毒作用。2.給藥劑量為20mg/kg的TS在PCV2感染小鼠模型中具有抗PCV2的作用,且能夠刺激機體IL-2的分泌和對脾臟指數(shù)、IFN-γ分泌的顯著增加。
【關(guān)鍵詞】：PCV2 茶皂素 抗病毒
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S853.74
【目錄】：

• 摘要7-9
• 文獻綜述9-19
• 1. 豬圓環(huán)病毒研究進展9-13
• 1.1 豬圓環(huán)病毒的發(fā)現(xiàn)9
• 1.2 分子生物學特性9-10
• 1.3 基因組結(jié)構(gòu)特征10
• 1.4 編碼的主要蛋白10-11
• 1.5 PCV2致病機理11
• 1.6 PCV2的檢測方法11-13
• 1.7 PCV2相關(guān)疾病的防治13
• 2. 茶皂素生物活性的研究13-16
• 2.1 溶血和魚毒活性13-14
• 2.2 抗菌活性14
• 2.3 消炎與抗氧化作用14
• 2.4 對機體免疫功能的影響14-15
• 2.5 生物激素樣作用15
• 2.6 作為生物農(nóng)藥15
• 2.7 抗病毒作用15-16
• 3. 天然抗病毒藥物的研究概況16-19
• 3.1 抗病毒活性成分16
• 3.2 抗病毒研究的方法16-17
• 3.3 天然抗病毒藥物的作用機制17-19
• 前言19-20
• 試驗部分20-54
• 1 試驗材料20-23
• 1.1 實驗動物、細胞株及病毒20
• 1.2 主要試劑20
• 1.3 主要試劑的配制20-22
• 1.4 主要試驗儀器22-23
• 2 試驗方法23-35
• 2.1 茶皂素含量的測定23
• 2.2 茶皂素體外溶血活性測定23-24
• 2.3 茶皂素在小鼠體內(nèi)的安全性評價24-26
• 2.4 PK-15細胞的準備26-27
• 2.5 PCV2的準備27-28
• 2.6 TS細胞毒性測定28
• 2.7 細胞感染模型PCV2 Cap基因的檢測28-32
• 2.8 PCV2感染小鼠模型的建立32-33
• 2.9 感染小鼠組織中PCV2載量的測定33
• 2.10 小鼠體重變化、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的測定33
• 2.11 小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量水平的測定33-34
• 2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析34-35
• 3 試驗結(jié)果35-51
• 3.1 茶皂素含量測定結(jié)果35
• 3.2 茶皂素體外溶血活性測定結(jié)果35-36
• 3.3 茶皂素體內(nèi)安全性評價結(jié)果36-38
• 3.4 PCV2毒力測定結(jié)果38
• 3.5 TS細胞毒性測定結(jié)果38-39
• 3.6 細胞模型PCV2 Cap基因的檢測結(jié)果39-43
• 3.7 PCV2感染小鼠模型的建立結(jié)果43-44
• 3.8 感染小鼠肝臟中PCV2載量測定結(jié)果44-45
• 3.9 小鼠體重變化、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的測定結(jié)果45-49
• 3.10 小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量的測定結(jié)果49-51
• 4 分析與討論51-53
• 4.1 TS的毒性評價51
• 4.2 PCV2感染小鼠模型的評價51
• 4.3 TS在體內(nèi)外對PCV2復制的影響51-52
• 4.4 TS抗PCV2機制的初步探討52-53
• 5 全文結(jié)論53-54
• 參考文獻54-61
• Abstract61-63
• 致謝63

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