發(fā)布時間：2021-10-29 19:22

　　豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、豬血凝性腦脊髓炎病毒（Porcine hemmagglutinatipg encephalomyelitis virus,PHEV）及豬丁型冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）均屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬,在臨床上都可引起仔豬的水樣腹瀉和嘔吐等癥狀,且致死率較高,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。越來越多的研究表明,這四種病毒在臨床上常呈混合感染,為疾病的鑒別診斷帶來巨大的挑戰(zhàn)。目前,對上述病毒建立的檢測方法多數(shù)是針對單一病毒,聯(lián)合檢測方法較少�？紤]到四種病毒都是從形態(tài)學上無法區(qū)分的冠狀病毒,而且感染仔豬的臨床特征有一定的相似性,因此本研究從鑒別診斷方法入手,建立了可同時檢測和區(qū)分四種仔豬易感冠狀病毒的多重RT-PCR檢測方法,并初步用于臨床樣本檢測,對于該類病原感染的早期疫情診斷和流行病學調(diào)查具有重要意義。研究取得如下結果:根據(jù)GenBank上發(fā)表的四種冠狀病毒... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
符號及縮略語說明
引言
第一篇 文獻綜述
    1 豬傳染性胃腸炎病毒的概述
        1.1 豬傳染性胃腸炎及豬傳染性胃腸炎病毒的研究進展
        1.2 豬傳染性胃腸炎病毒檢測技術研究進展
    2 豬流行性腹瀉病毒概述
        2.1 豬流行性腹瀉及豬流行性腹瀉病毒的研究進展
        2.2 豬流行性腹瀉病毒檢測技術研究進展
    3 豬血凝性腦脊髓炎病毒研究進展
        3.1 豬血凝性腦脊髓炎及豬血凝性腦脊髓炎病毒的研究進展
        3.2 豬血凝性腦脊髓炎病毒檢測技術研究進展
    4 豬丁型冠狀病毒研究進展
        4.1 豬丁型冠狀病毒病及豬丁型冠狀病毒病毒的研究進展
        4.2 豬丁型冠狀病毒病毒檢測技術研究進展
第二篇 實驗內(nèi)容
    第一章 四種冠狀病毒單一RT-PCR檢測方法的初步建立
        1.1 材料
            1.1.1 病毒和毒株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 引物的設計與合成
            1.2.2 樣品及模板制備
            1.2.3 單一RT-PCR反應
            1.2.4 RT-PCR擴增產(chǎn)物的純化和回收
            1.2.5 連接和轉化
            1.2.6 陽性重組質(zhì)粒的鑒定及PCR鑒定
            1.2.7 單一RT-PCR反應的靈敏性實驗
            1.2.8 單一RT-PCR反應的特異性實驗
        1.3 結果
            1.3.1 單一RT-PCR退火溫度確定
            1.3.2 單一RT-PCR方法中引物濃度確定
            1.3.3 單一RT-PCR反應的靈敏性實驗
            1.3.4 單一RT-PCR反應的特異性實驗
        1.4 討論
        1.5 小結
    第二章 豬四種冠狀病毒的多重RT-PCR檢測方法的建立及初步應用
        2.1 材料
            2.1.1 菌株及毒株
            2.1.2 待檢臨床樣品
            2.1.3 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 二重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.2.2 三重RT-PCR方法的擴增及退火溫度的優(yōu)化
            2.2.3 四種病毒的四重RT-PCR檢測方法的建立及初步應用
        2.3 結果
            2.3.1 二重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.3.2 三重RT-PCR方法的退火溫度的優(yōu)化
            2.3.3 四重RT-PCR檢測方法的建立及初步應用
        2.4 討論
        2.5 小結
第三篇 結論
參考文獻
導師簡介
個人簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒間接免疫熒光檢測方法的建立[J]. 朱蘊暖,張鑫,朱向東,陳建飛,時洪艷,石達,王鑫,季朝陽,馮力.  中國獸醫(yī)科學. 2017(01)
[2]同時檢測PEDV和TGEV及PDCoV的多重RT-PCR方法的建立及初步應用[J]. 任玉鵬,張斌,湯承,曹恭貌,岳華.  中國獸醫(yī)科學. 2016(06)
[3]豬德爾塔冠狀病毒感染的防控[J]. 萬遂如.  養(yǎng)豬. 2016(02)
[4]新現(xiàn)豬Delta冠狀病毒RT-PCR檢測方法的建立及其應用[J]. 張帆帆,宋德平,周信榮,黃冬艷,李安琪,彭棋,陳燕君,吳瓊,何后軍,唐玉新.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2016(07)
[5]豬δ冠狀病毒的研究進展[J]. 方譜縣,方六榮,董楠,肖少波.  病毒學報. 2016(02)
[6]豬傳染性腦脊髓炎的鑒別診斷及防治措施[J]. 趙宏濤,嚴飛,劉亞輝.  畜牧與飼料科學. 2015(05)
[7]豬傳染性胃腸炎病毒S基因主要抗原位點A和D的原核表達及間接ELISA檢測方法的建立[J]. 牟春曉,朱立麒,邢憲平,楊倩.  中國獸醫(yī)科學. 2015(04)
[8]豬腹瀉病例中PEDV、TGEV及PRV的感染調(diào)查[J]. 孫振釗,趙偉男,王靖飛.  動物醫(yī)學進展. 2014(05)
[9]豬血凝性腦脊髓炎病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立及山東省豬血清抗體檢測分析[J]. 劉立卓,趙家寬,賀文琦,蘭云剛,呂曉玲,王桂花,常靈竹,趙魁,高豐,成子強,靳朝.  中國獸醫(yī)學報. 2014(05)
[10]豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬博卡病毒多重PCR檢測方法的建立[J]. 焦洋,姜焱,王凱民,張常印,雷治海,唐泰山.  動物醫(yī)學進展. 2013(08)

碩士論文
[1]豬血凝性腦脊髓炎病毒雙抗夾心ELISA抗原檢測試劑盒的研制與應用[D]. 尹洋.吉林大學 2017
[2]一起豬血凝性腦脊髓炎的診斷[D]. 張月香.吉林大學 2016
[3]內(nèi)蒙古豬傳染性胃腸炎流行病學調(diào)查及豬傳染性胃腸炎病毒S基因序列分析[D]. 李靜.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2016
[4]豬流行性腹瀉病毒的流行病學調(diào)查及快速檢測方法的初步建立[D]. 趙振鵬.揚州大學 2016
[5]豬傳染性胃腸炎病毒LJ-12株的分離及鑒定[D]. 姜春霞.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[6]豬傳染性胃腸炎病毒M基因的克隆、表達及ELISA抗體檢測方法的建立[D]. 張小波.河北農(nóng)業(yè)大學 2010



本文編號：3465257