為探索快速生長期馬鹿（Cervus elaphus）鹿茸生長點軟骨中新發(fā)現(xiàn)的低拷貝microRNAPC-3p-2869的生物學(xué)功能。本研究利用microRNAPC-3p-2869的預(yù)測靶標(biāo),參與肽鏈延伸、蛋白質(zhì)翻譯后修飾、細胞骨架調(diào)節(jié)、細胞周期、生長和死亡調(diào)控等,同時在真核細胞中高度保守的GTP結(jié)合蛋白eEF1A1（真核翻譯延伸因子1A1）進行驗證。通過熒光素酶報告系統(tǒng)、定量逆轉(zhuǎn)錄PCR以及western blot實驗研究microRNA PC-3p-2869對eEF1A1的調(diào)控作用,同時采用細胞增殖、遷移和侵襲實驗研究microRNA PC-3p-2869對細胞生理功能的影響。結(jié)果顯示:（1）當(dāng)microRNA PC-3p-2869 mimics與eEF1A1 3’UTR野生型重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞系時,相較于其他實驗組,本組的熒光素酶的表達量明顯下降。（2）當(dāng) microRNA PC-3p-2869 mimics 和 NC mimics（negative control mimics,NC）分別轉(zhuǎn)染MG63細胞系時,western blot實驗檢測microRNA PC-3p-... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的產(chǎn)生和加工過程［７４１??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ１７４１??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???預(yù)測或篩選ｍｉｃｒｏ?ＲＮ?Ａ結(jié)合位點??Ｃ??＞?ｆ??ｍｉＲＮＡ／ｍＲＮＡ互作關(guān)系??．??外源ｍｉＲＮＡ和?ｍｉＲＮＡ對耙標(biāo)?ｍｉＲＮＡ對細胞??ｍＲＮＡ共轉(zhuǎn)?蛋白的影響?功能的影響??圖１－４?ｍｉｃｒｏＲＮＡ功能驗證流程圖??Ｆｉｇ?１－４?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｆｌｏｗ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ??１．６?ＭｉｃｒｏＲＮＡ的異源表達與調(diào)控作用??生物不是孤立存在的，相反，大多數(shù)生物通過相互聯(lián)系的生態(tài)系統(tǒng)進行交流。近年??來，跨物種交流的研究受到了廣泛的關(guān)注。這一概念被定義為不同物種的動物、植物、??真菌和細菌之間通過一系列激素或激素類化學(xué)物質(zhì)的交流。隨后，隨著細菌信號調(diào)節(jié)哺??乳動物和植物細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及宿主激素與群體感應(yīng)分子交叉信號調(diào)節(jié)細菌基因表達的??認識，這一領(lǐng)域得到擴展。近年來，有報道表明，被稱為ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ的小的非編碼??ＲＮＡ不僅在其來源的細胞中發(fā)揮功能，還可以從一個物種傳導(dǎo)進另一個物種，進行不??同的物種間交流和信號干擾ｔ１１９］。其中有研究表明３？末端帶有２＇－０－甲基化的植物??ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以穩(wěn)定地存在于人類和草食動物的血清和組織中，其濃度類似于某些內(nèi)源??性哺乳動物ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ［１２Ｃ）ｌ。在ＬａＭｏｎｔｅ研究中人類ｍｉｃｒｏＲＮＡ影響瘧原蟲的生物學(xué)和??生存＾１。另外病毒和宿主基因表達的調(diào)節(jié)可以通過ｍｉｃｒ〇ＲＮＡ發(fā)生，大量研宄表明病??毒可以劫持宿主細胞的ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子機器生成自己的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉ１２２－１２４］，目前的證據(jù)??表明病毒可以利用ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ操縱病毒和

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???３實驗結(jié)果??３．１測序結(jié)果??將插入的ｅＥＦｌＡｌ－３＇ＵＴＲ－ＭＵＴ?Ｒ序列（不含酶切位點）和重組載體６￡？１八１－３＇１１＾－??ＭＵＴｐＭＩＲ－ＲＥＰＯＲＴ?（ＰＭＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｌ．ＰＭｌＲ－Ｒ＿４９４７］０２．Ｂ１８０６０４＿Ｂ０）的測序序列進行??比對，比對結(jié)果圖３－丨表明ｅＥＦｌＡｌ?３＇ＵＴＲ突變型重組載體構(gòu)建成功。??＋?Ｘｅ３〇ｒｉｔ￥?ＩｌｉｉｌＨＩＩｌｌｌＨｌｉｌｉｆｔｌｉｌｉＨＩＨ??Ｍ＆〕ｉ?－?ｗＡＡｌ?？ＺｎｒｔＡｓ－．ｉ?ｔｉｉｉｎ??１０?２０?３０?４Ｑ?５０?６０?７０?８０??ｅＥＦｌＡｌ－Ｓ＇ＵＴＲ－ＫＵＩ?Ｒ．ｓｅｑ??０??？ＫＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｉ?．?ＰＭＩＲ－Ｒ．?４５４７１０２?．Ｂ１Ｓ０￡０４＿３０?ＴＣＳＳＡＡＣＳＩＴＧＴＡＡＡＣＳＡＣＳＳＣＣＡＳＴＧＣＣＡＡＳＣＩＡＳＣＧＳＣＣＳＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＩＣＣＸＡＴＳｉＡＡＡＴＡＡＡ?８０??—?？？？??ＭａＤｃｒｉｔｙ?ＡＳＡＴＣＣｍｙｉＡＡＳＣＩＴＣ＾ＴＩＣＴＳＡＡ＾ＩＴＴＩ美?ＣＳＡＴＴＩＡＴｄｌＡＡＣｐ－ＳＩＣＩＴｎＡｉｐＡＣＴＡＡＡＣＴＴ＾＾－ｄ１１＾??９Ｑ?１００?１１０?１２０?１３０?１４０?１５０?１６０??￡￡Ｆ１Ａ１－３？ＵＩＲ－ＫＵＴ?Ｒ．ｓｅｑ??ＡＳＣｎＴＣｎＣＴＳＡＡＳＧｎｉＴＡ二？ＡｍＡＩＣＡｎＡＡＣＣ＾ＳＴＣｉｍＡＣＴＡ二＾ＡＣＩＩＡＡＡＩＣ，３Ａ?￡４??ＦＭＩＥ－ｅＥＦＩＡｉ－１．?ＰＨＩＲ－Ｒ．?４９４７１０２?．Ｂ１８０￡０４＿Ｂ０?ＡＳＡＴＣＣｎＴＡＴ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]eEF1A1回復(fù)表達對敲除eEF1A1基因的Jurkat細胞增殖、凋亡的影響及機制研究[J]. 黃毅,胡建達,伍嚴安,鄭靜,齊元麟,陳英玉,黃肖利.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2013(02)

碩士論文
[1]MicroRNA PC-5p-1090靶向SOX9基因[D]. 肖慧.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[2]MicroRNA PC-5p-1090靶向MARCKS并抑制細胞增殖[D]. 吳盡.東北林業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3465403