為探索快速生長期馬鹿（Cervus elaphus）鹿茸生長點(diǎn)軟骨中新發(fā)現(xiàn)的低拷貝microRNAPC-3p-2869的生物學(xué)功能。本研究利用microRNAPC-3p-2869的預(yù)測(cè)靶標(biāo),參與肽鏈延伸、蛋白質(zhì)翻譯后修飾、細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)、細(xì)胞周期、生長和死亡調(diào)控等,同時(shí)在真核細(xì)胞中高度保守的GTP結(jié)合蛋白eEF1A1（真核翻譯延伸因子1A1）進(jìn)行驗(yàn)證。通過熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)、定量逆轉(zhuǎn)錄PCR以及western blot實(shí)驗(yàn)研究microRNA PC-3p-2869對(duì)eEF1A1的調(diào)控作用,同時(shí)采用細(xì)胞增殖、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)研究microRNA PC-3p-2869對(duì)細(xì)胞生理功能的影響。結(jié)果顯示:（1）當(dāng)microRNA PC-3p-2869 mimics與eEF1A1 3’UTR野生型重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞系時(shí),相較于其他實(shí)驗(yàn)組,本組的熒光素酶的表達(dá)量明顯下降。（2）當(dāng) microRNA PC-3p-2869 mimics 和 NC mimics（negative control mimics,NC）分別轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞系時(shí),western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)microRNA PC-3p-... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的產(chǎn)生和加工過程［７４１??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ１７４１??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???預(yù)測(cè)或篩選ｍｉｃｒｏ?ＲＮ?Ａ結(jié)合位點(diǎn)??Ｃ??＞?ｆ??ｍｉＲＮＡ／ｍＲＮＡ互作關(guān)系??．??外源ｍｉＲＮＡ和?ｍｉＲＮＡ對(duì)耙標(biāo)?ｍｉＲＮＡ對(duì)細(xì)胞??ｍＲＮＡ共轉(zhuǎn)?蛋白的影響?功能的影響??圖１－４?ｍｉｃｒｏＲＮＡ功能驗(yàn)證流程圖??Ｆｉｇ?１－４?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｆｌｏｗ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ??１．６?ＭｉｃｒｏＲＮＡ的異源表達(dá)與調(diào)控作用??生物不是孤立存在的，相反，大多數(shù)生物通過相互聯(lián)系的生態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行交流。近年??來，跨物種交流的研究受到了廣泛的關(guān)注。這一概念被定義為不同物種的動(dòng)物、植物、??真菌和細(xì)菌之間通過一系列激素或激素類化學(xué)物質(zhì)的交流。隨后，隨著細(xì)菌信號(hào)調(diào)節(jié)哺??乳動(dòng)物和植物細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及宿主激素與群體感應(yīng)分子交叉信號(hào)調(diào)節(jié)細(xì)菌基因表達(dá)的??認(rèn)識(shí)，這一領(lǐng)域得到擴(kuò)展。近年來，有報(bào)道表明，被稱為ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ的小的非編碼??ＲＮＡ不僅在其來源的細(xì)胞中發(fā)揮功能，還可以從一個(gè)物種傳導(dǎo)進(jìn)另一個(gè)物種，進(jìn)行不??同的物種間交流和信號(hào)干擾ｔ１１９］。其中有研究表明３？末端帶有２＇－０－甲基化的植物??ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以穩(wěn)定地存在于人類和草食動(dòng)物的血清和組織中，其濃度類似于某些內(nèi)源??性哺乳動(dòng)物ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ［１２Ｃ）ｌ。在ＬａＭｏｎｔｅ研究中人類ｍｉｃｒｏＲＮＡ影響瘧原蟲的生物學(xué)和??生存＾１。另外病毒和宿主基因表達(dá)的調(diào)節(jié)可以通過ｍｉｃｒ〇ＲＮＡ發(fā)生，大量研宄表明病??毒可以劫持宿主細(xì)胞的ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子機(jī)器生成自己的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉ１２２－１２４］，目前的證據(jù)??表明病毒可以利用ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ操縱病毒和

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???３實(shí)驗(yàn)結(jié)果??３．１測(cè)序結(jié)果??將插入的ｅＥＦｌＡｌ－３＇ＵＴＲ－ＭＵＴ?Ｒ序列（不含酶切位點(diǎn)）和重組載體６￡？１八１－３＇１１＾－??ＭＵＴｐＭＩＲ－ＲＥＰＯＲＴ?（ＰＭＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｌ．ＰＭｌＲ－Ｒ＿４９４７］０２．Ｂ１８０６０４＿Ｂ０）的測(cè)序序列進(jìn)行??比對(duì)，比對(duì)結(jié)果圖３－丨表明ｅＥＦｌＡｌ?３＇ＵＴＲ突變型重組載體構(gòu)建成功。??＋?Ｘｅ３〇ｒｉｔ￥?ＩｌｉｉｌＨＩＩｌｌｌＨｌｉｌｉｆｔｌｉｌｉＨＩＨ??Ｍ＆〕ｉ?－?ｗＡＡｌ?？ＺｎｒｔＡｓ－．ｉ?ｔｉｉｉｎ??１０?２０?３０?４Ｑ?５０?６０?７０?８０??ｅＥＦｌＡｌ－Ｓ＇ＵＴＲ－ＫＵＩ?Ｒ．ｓｅｑ??０??？ＫＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｉ?．?ＰＭＩＲ－Ｒ．?４５４７１０２?．Ｂ１Ｓ０￡０４＿３０?ＴＣＳＳＡＡＣＳＩＴＧＴＡＡＡＣＳＡＣＳＳＣＣＡＳＴＧＣＣＡＡＳＣＩＡＳＣＧＳＣＣＳＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＩＣＣＸＡＴＳｉＡＡＡＴＡＡＡ?８０??—?？？？??ＭａＤｃｒｉｔｙ?ＡＳＡＴＣＣｍｙｉＡＡＳＣＩＴＣ＾ＴＩＣＴＳＡＡ＾ＩＴＴＩ美?ＣＳＡＴＴＩＡＴｄｌＡＡＣｐ－ＳＩＣＩＴｎＡｉｐＡＣＴＡＡＡＣＴＴ＾＾－ｄ１１＾??９Ｑ?１００?１１０?１２０?１３０?１４０?１５０?１６０??￡￡Ｆ１Ａ１－３？ＵＩＲ－ＫＵＴ?Ｒ．ｓｅｑ??ＡＳＣｎＴＣｎＣＴＳＡＡＳＧｎｉＴＡ二？ＡｍＡＩＣＡｎＡＡＣＣ＾ＳＴＣｉｍＡＣＴＡ二＾ＡＣＩＩＡＡＡＩＣ，３Ａ?￡４??ＦＭＩＥ－ｅＥＦＩＡｉ－１．?ＰＨＩＲ－Ｒ．?４９４７１０２?．Ｂ１８０￡０４＿Ｂ０?ＡＳＡＴＣＣｎＴＡＴ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]eEF1A1回復(fù)表達(dá)對(duì)敲除eEF1A1基因的Jurkat細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制研究[J]. 黃毅,胡建達(dá),伍嚴(yán)安,鄭靜,齊元麟,陳英玉,黃肖利.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2013(02)

碩士論文
[1]MicroRNA PC-5p-1090靶向SOX9基因[D]. 肖慧.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[2]MicroRNA PC-5p-1090靶向MARCKS并抑制細(xì)胞增殖[D]. 吳盡.東北林業(yè)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3465403