鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）可侵害鴨、鵝、火雞、雞、野雞等多種動物,主要侵害2-8周齡鴨,是危害水禽養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一。鴨疫里默氏桿菌存在大腸桿菌RseP基因相似的核苷酸序列,編碼金屬蛋白酶。大腸桿菌RseP蛋白酶通過裂解抗σ^E蛋白（RseA）,參與細胞膜應激反應,在細菌抗應激中具有重要作用。本文在PCR檢測R.anatipestifer的RseP基因的基礎上,對基因檢測陰性和陽性菌株的菌體蛋白中RseP蛋白、生長、利用金屬離子、致病性、對不利因素的抗性等進行測定,比較菌株間的差異性,為進一步研究RseP基因的功能奠定基礎。主要研究內容及結果如下:1鴨疫里默氏桿菌RseP的檢測以OmpA基因特異性PCR檢測,確定為鴨疫里默氏桿菌的22株細菌為研究對象,利用PCR特異性擴增RseP基因片段進行分類,結果顯示,RA20、RA22、RA24、RA25、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48株等17株細菌為Rse... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴增RseP片段Fig.1TheresultofPCRamplificationofRsePgene

西南大學獸醫(yī)碩士學位論文22pET-32a，瓊脂糖電泳回收目的DNA片段（267bp）和線性化pET-32a（大約5800bp）（圖4）。將目的DNA片段與線性化pET-32a連結、轉化，獲得陽性克攏陽性克隆用質粒pET-32a的鑒定引物pET-32a-F1/pET-R進行PCR擴增，結果如圖（圖5），與預期大小967bp一致。將構建的重組表達質粒pET-32a-RseP轉入E.coliBL21(DE)，經IPTG誘導，能表達重組蛋白（圖6）。重組蛋白以胞內可溶性形式存在（圖7）。AB圖2.PCR擴增OmpA片段Fig.2TheresultofPCRamplificationofOmpAgeneM：MarkerDL2000（100，250，500，750，1000，2000bp）；A：1~8：RA34、RA35、RA36、RA37、RA42、RA43、RA44和RA25號菌擴增物；B：1-4：RA19和RA46的RseP擴增產物；5-8：RA19和RA46的OmpA擴增產物；C：1-17：RA20、RA22、RA24、RA45、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48的OmpA擴增產物M：DNAMarkerDL2000；A:1~8：ThePCRproductofOmpAgeneinRA34,RA35,RA36,RA37,RA42,RA43,RA44,RA45;B.1~4:ThePCRproductofRsePgeneinRA19andRA46;5~8:ThePCRproductofOmpAgeneinRA19andRA46;C:1~17：ThePCRproductofRsePgeneinRA20,RA22,RA24,RA26,RA25,RA27,RA28,RA29,RA30,RA31,RA33,RA38,RA39,RA40,RA41,RA47,RA48

第3章鴨疫里默氏桿菌RseP陽性和陰性菌株的比較23圖3.瓊脂糖電泳檢測RseP基因的PCR擴增產物Fig.3TheresultofPCRamplificationofRsePgene1：RseP基因的PCR擴增產物；M：DNAMarkerDL100001：ThePCRproductofRsePgene；M：DNAMarkerDL10000ABC圖4.重組質粒pMD19-RseP的雙酶切鑒定Fig.4IdentificationofpMD19-RsePdigestedbyrestrictionM：DNAMarkerDL2000；1~2：pMD19-RseP雙酶切產物；3~4：pET-32a雙酶切產物M：DNAMarkerDL2000；1~2：TheproductsofpMD19-RsePdigestedbyBamHΙ、HindIII；3~4：TheproductsofpET-32adigestedbyBamHΙ、HindIII


本文編號：3462375