鴨疫里默氏桿菌RseP陽(yáng)性和陰性菌株的比較
發(fā)布時(shí)間：2021-10-28 06:00
鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）可侵害鴨、鵝、火雞、雞、野雞等多種動(dòng)物,主要侵害2-8周齡鴨,是危害水禽養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一。鴨疫里默氏桿菌存在大腸桿菌RseP基因相似的核苷酸序列,編碼金屬蛋白酶。大腸桿菌RseP蛋白酶通過(guò)裂解抗σE蛋白（RseA）,參與細(xì)胞膜應(yīng)激反應(yīng),在細(xì)菌抗應(yīng)激中具有重要作用。本文在PCR檢測(cè)R.anatipestifer的RseP基因的基礎(chǔ)上,對(duì)基因檢測(cè)陰性和陽(yáng)性菌株的菌體蛋白中RseP蛋白、生長(zhǎng)、利用金屬離子、致病性、對(duì)不利因素的抗性等進(jìn)行測(cè)定,比較菌株間的差異性,為進(jìn)一步研究RseP基因的功能奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1鴨疫里默氏桿菌RseP的檢測(cè)以O(shè)mpA基因特異性PCR檢測(cè),確定為鴨疫里默氏桿菌的22株細(xì)菌為研究對(duì)象,利用PCR特異性擴(kuò)增RseP基因片段進(jìn)行分類(lèi),結(jié)果顯示,RA20、RA22、RA24、RA25、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48株等17株細(xì)菌為Rse...
【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
PCR擴(kuò)增RseP片段Fig.1TheresultofPCRamplificationofRsePgene
西南大學(xué)獸醫(yī)碩士學(xué)位論文22pET-32a，瓊脂糖電泳回收目的DNA片段（267bp）和線性化pET-32a（大約5800bp）（圖4）。將目的DNA片段與線性化pET-32a連結(jié)、轉(zhuǎn)化，獲得陽(yáng)性克攏陽(yáng)性克隆用質(zhì)粒pET-32a的鑒定引物pET-32a-F1/pET-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果如圖（圖5），與預(yù)期大小967bp一致。將構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-RseP轉(zhuǎn)入E.coliBL21(DE)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，能表達(dá)重組蛋白（圖6）。重組蛋白以胞內(nèi)可溶性形式存在（圖7）。AB圖2.PCR擴(kuò)增OmpA片段Fig.2TheresultofPCRamplificationofOmpAgeneM：MarkerDL2000（100，250，500，750，1000，2000bp）；A：1~8：RA34、RA35、RA36、RA37、RA42、RA43、RA44和RA25號(hào)菌擴(kuò)增物；B：1-4：RA19和RA46的RseP擴(kuò)增產(chǎn)物；5-8：RA19和RA46的OmpA擴(kuò)增產(chǎn)物；C：1-17：RA20、RA22、RA24、RA45、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48的OmpA擴(kuò)增產(chǎn)物M：DNAMarkerDL2000；A:1~8：ThePCRproductofOmpAgeneinRA34,RA35,RA36,RA37,RA42,RA43,RA44,RA45;B.1~4:ThePCRproductofRsePgeneinRA19andRA46;5~8:ThePCRproductofOmpAgeneinRA19andRA46;C:1~17：ThePCRproductofRsePgeneinRA20,RA22,RA24,RA26,RA25,RA27,RA28,RA29,RA30,RA31,RA33,RA38,RA39,RA40,RA41,RA47,RA48
第3章鴨疫里默氏桿菌RseP陽(yáng)性和陰性菌株的比較23圖3.瓊脂糖電泳檢測(cè)RseP基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.3TheresultofPCRamplificationofRsePgene1：RseP基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；M：DNAMarkerDL100001：ThePCRproductofRsePgene；M：DNAMarkerDL10000ABC圖4.重組質(zhì)粒pMD19-RseP的雙酶切鑒定Fig.4IdentificationofpMD19-RsePdigestedbyrestrictionM：DNAMarkerDL2000；1~2：pMD19-RseP雙酶切產(chǎn)物；3~4：pET-32a雙酶切產(chǎn)物M：DNAMarkerDL2000；1~2：TheproductsofpMD19-RsePdigestedbyBamHΙ、HindIII；3~4：TheproductsofpET-32adigestedbyBamHΙ、HindIII
本文編號(hào)：3462375
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【部分圖文】：
PCR擴(kuò)增RseP片段Fig.1TheresultofPCRamplificationofRsePgene
西南大學(xué)獸醫(yī)碩士學(xué)位論文22pET-32a，瓊脂糖電泳回收目的DNA片段（267bp）和線性化pET-32a（大約5800bp）（圖4）。將目的DNA片段與線性化pET-32a連結(jié)、轉(zhuǎn)化，獲得陽(yáng)性克攏陽(yáng)性克隆用質(zhì)粒pET-32a的鑒定引物pET-32a-F1/pET-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果如圖（圖5），與預(yù)期大小967bp一致。將構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-RseP轉(zhuǎn)入E.coliBL21(DE)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，能表達(dá)重組蛋白（圖6）。重組蛋白以胞內(nèi)可溶性形式存在（圖7）。AB圖2.PCR擴(kuò)增OmpA片段Fig.2TheresultofPCRamplificationofOmpAgeneM：MarkerDL2000（100，250，500，750，1000，2000bp）；A：1~8：RA34、RA35、RA36、RA37、RA42、RA43、RA44和RA25號(hào)菌擴(kuò)增物；B：1-4：RA19和RA46的RseP擴(kuò)增產(chǎn)物；5-8：RA19和RA46的OmpA擴(kuò)增產(chǎn)物；C：1-17：RA20、RA22、RA24、RA45、RA26、RA27、RA28、RA29、RA30、RA31、RA33、RA38、RA39、RA40、RA41、RA47和RA48的OmpA擴(kuò)增產(chǎn)物M：DNAMarkerDL2000；A:1~8：ThePCRproductofOmpAgeneinRA34,RA35,RA36,RA37,RA42,RA43,RA44,RA45;B.1~4:ThePCRproductofRsePgeneinRA19andRA46;5~8:ThePCRproductofOmpAgeneinRA19andRA46;C:1~17：ThePCRproductofRsePgeneinRA20,RA22,RA24,RA26,RA25,RA27,RA28,RA29,RA30,RA31,RA33,RA38,RA39,RA40,RA41,RA47,RA48
第3章鴨疫里默氏桿菌RseP陽(yáng)性和陰性菌株的比較23圖3.瓊脂糖電泳檢測(cè)RseP基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.3TheresultofPCRamplificationofRsePgene1：RseP基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；M：DNAMarkerDL100001：ThePCRproductofRsePgene；M：DNAMarkerDL10000ABC圖4.重組質(zhì)粒pMD19-RseP的雙酶切鑒定Fig.4IdentificationofpMD19-RsePdigestedbyrestrictionM：DNAMarkerDL2000；1~2：pMD19-RseP雙酶切產(chǎn)物；3~4：pET-32a雙酶切產(chǎn)物M：DNAMarkerDL2000；1~2：TheproductsofpMD19-RsePdigestedbyBamHΙ、HindIII；3~4：TheproductsofpET-32adigestedbyBamHΙ、HindIII
本文編號(hào)：3462375
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