綿羊支原體性肺炎是由綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoiae,MO）引發(fā)的一種高度接觸傳染性疾病,MO既可感染綿羊,也可感染山羊。本研究將MO內(nèi)蒙古分離株（SZWQ株）復活后大量培養(yǎng),提取其基因組。根據(jù)類p102的DNA序列設計特異性引物,大量擴增類p102基因。由于類p102基因序列中含有一個編碼色氨酸的密碼子TGA,在原核表達系統(tǒng)中TGA是終止密碼子,而TGG編碼色氨酸。所以在本試驗中設計兩對特異性引物,通過重疊延伸PCR法,將類p102基因的一個密碼子TGA突變?yōu)門GG,從而使類p102基因在原核表達系統(tǒng)中順利表達。表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測。結(jié)果顯示：蛋白分子量大小為58kDa,與預期目的蛋白的大小一致。將純化后的融合蛋白經(jīng)Western Blot檢測。結(jié)果表明：所表達出的外源融合蛋白具有良好的反應原性。將純化后的融合蛋白制作成疫苗,對小鼠進行動物免疫試驗。小鼠經(jīng)過4次免疫后,使用ELISA方法檢測小鼠的血清中有無類p102的抗體產(chǎn)生。結(jié)果表明：通過4次免疫后,小鼠血清中均產(chǎn)生了針對類p102的抗體,且融合蛋白免疫組與PBS對照組相比差異顯著（P&... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1支原體的分類Fig.1Theclassificationofmycoplasma

圖2支原體模式圖

圖3支原體的結(jié)構(gòu)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]羊支原體肺炎防治研究進展[J]. 徐春光,郝永清,王明瑩,高明華.  動物醫(yī)學進展. 2014(01)
[2]豬肺炎支原體SC株P(guān)46基因的定點突變[J]. 邱文英,郝偉偉,徐靜,方鵬飛,張洪,向丕元.  四川畜牧獸醫(yī). 2013(03)
[3]豬肺炎支原體P102基因的突變[J]. 郭丹,陳紅漫,李媛,陳超,曹培麗,辛九慶.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2009(03)
[4]綿羊支原體肺炎診斷及病原的分離與鑒定[J]. 成連貴.  家畜生態(tài)學報. 2007(02)
[5]穿透支原體脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白誘導人單核細胞產(chǎn)生炎癥性細胞因子[J]. 吳移謀,曾焱華,鄧仲良,詹利生,李忠玉,陳超群.  中華傳染病雜志. 2006(04)
[6]山羊傳染性胸膜肺炎的流行現(xiàn)狀和防制技術(shù)[J]. 汪代華,徐剛毅.  四川畜牧獸醫(yī). 2005(10)
[7]穿透支原體P35蛋白對細胞因子的誘生作用[J]. 朱翠明,吳移謀,萬艷平,余敏君.  中華微生物學和免疫學雜志. 2004(09)
[8]Activation of nuclear factor κB and induction of inducible nitric oxide synthase by lipid-associated membrane proteins isolated from Mycoplasma penetrans[J]. 曾焱華,吳移謀,張文波,余敏君,朱翠明,譚立志.  Chinese Medical Journal. 2004(07)
[9]絲狀霉形體絲狀亞種SC型脂蛋白LppQN末端基因克隆與序列分析[J]. 辛九慶,高玉龍,李媛,王硯范.  中國獸醫(yī)學報. 2004(03)
[10]霉形體及霉形體病研究進展[J]. 包慧芳.  中國獸醫(yī)科技. 2002(08)



本文編號：3460589