發(fā)布時(shí)間：2021-10-27 01:43

　　內(nèi)蒙古絨山羊是自治區(qū)地方優(yōu)質(zhì)資源品種,絨毛生產(chǎn)性能是內(nèi)蒙古絨山羊的重要經(jīng)濟(jì)性狀。影響絨毛生長(zhǎng)的因素有很多,而褪黑激素、miRNA是其中兩個(gè)非常重要的因素。近年來(lái),關(guān)于褪黑激素影響絨山羊絨毛生長(zhǎng)的研究發(fā)現(xiàn),持續(xù)埋植褪黑素可促進(jìn)羊絨提前進(jìn)入生長(zhǎng)期,誘發(fā)2次生絨并在分子水平改變了很多絨毛生長(zhǎng)相關(guān)基因的表達(dá),而對(duì)于mi RNA這一重要毛發(fā)生長(zhǎng)調(diào)控因子的研究未見詳細(xì)報(bào)道。因此,本研究以mi RNA為介導(dǎo),通過(guò)microRNA靶基因指紋圖譜、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、RNA-seq等試驗(yàn)手段,建立外源褪黑激素、miRNA及其靶基因的關(guān)系,進(jìn)一步從分子水平上的解析褪黑激素促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)的機(jī)理,為提高絨毛產(chǎn)量和品質(zhì)提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：1、microRNA靶基因指紋圖譜（MTFP）方法的建立建立了一種實(shí)驗(yàn)性獲得miRNA靶基因的新方法（microRNA Targets Finger Print, MTFP）。該方法在設(shè)定上游種子序列的互補(bǔ)序列和下游錨定序列的基礎(chǔ)上添加特殊接頭,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄和特殊二步PCR將microRNA的靶基因擴(kuò)增；擴(kuò)增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝膠電泳中檢測(cè)其片段大小... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 皮膚及毛囊的結(jié)構(gòu)組成
        1.1.1 皮膚的結(jié)構(gòu)組成
        1.1.2 毛囊的結(jié)構(gòu)組成
    1.2 毛囊形態(tài)發(fā)生及周期性生長(zhǎng)
        1.2.1 毛囊形態(tài)發(fā)生
        1.2.2 毛囊周期性生長(zhǎng)
    1.3 影響皮膚毛囊發(fā)育的因素
        1.3.1 褪黑激素(Melatonin,MT)
        1.3.2 microRNA與動(dòng)物皮毛發(fā)育
        1.3.3 microRNA靶基因的研究
    1.4 本研究目的和意義
2 研究一 microRNA靶基因指紋圖譜(MTFP)方法的建立
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)技術(shù)路線
    2.3 材料和方法
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 miR-203革巴基因檢測(cè)
        2.4.2 皮膚樣品miR-203靶基因的檢測(cè)分析
        2.4.3 序列比對(duì)
        2.4.4 實(shí)時(shí)定量結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 研究二 褪黑激素影響miRNA及其靶基因的研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 血液中MT的變化
        3.3.2 皮膚組織總RNA及小RNA提取
        3.3.3 miRNA熒光定量體系的建立
        3.3.4 熒光定量PCR產(chǎn)物的檢測(cè)
        3.3.5 絨毛生長(zhǎng)相關(guān)miRNA在不同試驗(yàn)皮膚組織中的表達(dá)
        3.3.6 埋植組和對(duì)照組內(nèi)各miRNA相關(guān)性變化
        3.3.7 miRNA靶基因電泳檢測(cè)結(jié)果
        3.3.8 miRNA靶基因測(cè)序結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 研究三 埋植組與對(duì)照組10月皮膚組織轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序分析
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 試驗(yàn)材料
        4.2.2 試驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 cDNA文庫(kù)質(zhì)檢結(jié)果
        4.3.2 RNA-Seq測(cè)序結(jié)果,de novo組裝
        4.3.3 差異表達(dá)序列的篩選
        4.3.4 絨毛相關(guān)4個(gè)pathway在10月埋植組與對(duì)照組表達(dá)情況
        4.3.5 差異基因的GO、KEGG富集分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 研究四 褪黑激素介導(dǎo)miRNA靶基因的研究
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 試驗(yàn)數(shù)據(jù)及軟件
        5.2.2 方法
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 miRNA靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果
        5.3.2 候選miRNA靶基因
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
6 總體結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附圖
附表
附錄
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3460621