精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因方法（sperm-mediated gene transfer,SMGT）是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的有效途徑,具有簡便、高效等特點(diǎn),但機(jī)制至今不明確,成了限制這種方法發(fā)展運(yùn)用的瓶頸和世界性難題,造成SMGT存在著極大的隨機(jī)性和不確定性。目前國際上對(duì)此研究較少,且主要集中在CD4分子上。眾多蛋白質(zhì)之間在許多重要的生命活動(dòng)中都是彼此協(xié)調(diào)和控制的,基因組中的編碼蛋白質(zhì)的基因之間存在著功能上的聯(lián)系。我們前期研究證明CD4分子在山羊精子結(jié)合內(nèi)化外源DNA過程中起到主要作用,并以其為誘餌蛋白,利用酵母雙雜交系統(tǒng),篩選與CD4相互作用的8個(gè)候選分子。本研究對(duì)其中兩個(gè)主要的候選分子：RanBP9和CD320,進(jìn)行基因克隆、序列分析、組織表達(dá)與基因多態(tài)性分析,為進(jìn)一步揭示這些候選分子在山羊精子轉(zhuǎn)運(yùn)外源DNA的作用,深入研究精子介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。RanBP9（Ran binding protein9,Ran結(jié)合蛋白9）在胚胎干細(xì)胞中可以白行發(fā)育,且在精子和卵子發(fā)生過程中具有重要調(diào)節(jié)作用。CD320參與體內(nèi)免疫反應(yīng),扮演受體重要角色,能夠介導(dǎo)物質(zhì)和信號(hào)的轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)運(yùn)。由于在山羊上這兩個(gè)基因的研... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
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第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 CD4及相關(guān)分子的結(jié)構(gòu)和功能研究新進(jìn)展
        1.1.1 CD4分子研究新進(jìn)展
        1.1.2 RanBP9研究新進(jìn)展
        1.1.3 CD320研究新進(jìn)展
    1.2 山羊品種(遺傳資源)
        1.2.1 大足黑山羊
        1.2.2 南江黃羊
    1.3 基因多態(tài)性研究方法與分析
        1.3.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)
        1.3.2 基因多態(tài)性分析方法
第二章 引言
    2.1 研究背景與意義
    2.2 技術(shù)路線
第三章 山羊RanBP9基因克隆與組織表達(dá)分析
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 主要試劑和溶液配制
        3.1.4 其他常用試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 組織總RNA的提取和檢測(cè)
        3.2.2 反轉(zhuǎn)錄cDNA
        3.2.3 山羊RanBP9基因PCR擴(kuò)增
        3.2.4 PCR產(chǎn)物回收純化
        3.2.5 山羊RanBP9基因的克隆
        3.2.6 山羊RanBP9基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.7 熒光定量PCR
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 RNA提取
        3.3.2 山羊RanBP9基因cDNA的擴(kuò)增
        3.3.3 菌液PCR結(jié)果
        3.3.4 山羊RanBP9 cDNA序列測(cè)序拼接結(jié)果
        3.3.5 RanBP9生物信息學(xué)分析結(jié)果
        3.3.6 RanBP9熒光定量PCR溶解曲線和擴(kuò)增曲線
        3.3.7 山羊不同組織中RanBP9基因的相對(duì)含量
    3.4 討論
        3.4.1 山羊組織中總RNA提取
        3.4.2 引物設(shè)計(jì)與菌液鑒定
        3.4.3 RanBP9相關(guān)結(jié)構(gòu)與功能信息
        3.4.4 半熒光定量PCR
        3.4.5 RanBP9基因的組織表達(dá)
第四章 山羊CD320基因克隆與組織表達(dá)分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 PCR反應(yīng)程序
        4.2.3 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
        4.2.4 熒光定量PCR反應(yīng)條件
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 RNA提取
        4.3.2 山羊CD320基因cDNA的擴(kuò)增
        4.3.3 菌液PCR結(jié)果
        4.3.4 山羊CD320 cDNA序列測(cè)序拼接結(jié)果
        4.3.5 CD320 cDNA序列生物信息學(xué)分析結(jié)果
        4.3.6 CD320熒光定量PCR溶解曲線和擴(kuò)增曲線
        4.3.7 山羊不同組織中CD320基因的相對(duì)含量
    4.4 討論
        4.4.1 引物設(shè)計(jì)與菌液鑒定
        4.4.2 CD320相關(guān)結(jié)構(gòu)與功能信息
        4.4.3 CD320基因的組織表達(dá)
第五章 山羊CD320基因多態(tài)性分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器：實(shí)驗(yàn)用儀器如表5-1所示
        5.1.3 試劑與藥品
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 全血DNA的提取
        5.2.2 山羊CD320基因的擴(kuò)增
        5.2.3 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        5.2.4 純化產(chǎn)物測(cè)序
        5.2.5 山羊CD320基因的聚丙烯酰胺凝膠電泳
    5.3 SSCP帶型區(qū)分
    5.4 山羊CD320基因的克隆
        5.4.1 連接反應(yīng)和轉(zhuǎn)化
        5.4.2 轉(zhuǎn)化子的篩選及PCR擴(kuò)增鑒定
    5.5 統(tǒng)計(jì)分析方法
        5.5.1 等位基因頻率和基因型頻率的計(jì)算
        5.5.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)
        5.5.3 遺傳多態(tài)性分析
    5.6 結(jié)果與分析
        5.6.1 山羊全血基因組DNA提取結(jié)果
        5.6.2 山羊CD320基因片段的擴(kuò)增結(jié)果
        5.6.3 山羊CD320基因的PCR-SSCP結(jié)果
        5.6.4 PCR產(chǎn)物的克隆
        5.6.5 CD320基因SNPs位點(diǎn)分析
        5.6.6 CD320基因遺傳多態(tài)性分析
    5.7 討論
        5.7.1 DNA提取的結(jié)果分析
        5.7.2 PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化
        5.7.3 普通PCR擴(kuò)增結(jié)果的分析
        5.7.4 PCR-SSCP條件的優(yōu)化
        5.7.5 山羊CD320基因的SNPs位點(diǎn)分析
        5.7.6 關(guān)于山羊CD320基因的遺傳多樣性分析
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在讀期間參與的課題和發(fā)表的文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3448316