本文關(guān)鍵詞：兔源干酪乳桿菌對仔兔小腸潘氏細(xì)胞分泌功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：斷奶仔兔容易發(fā)生腸道疾病,鑒于使用抗生素的弊端,利用益生菌等抗生素替代品將是必然趨勢。乳酸菌是豬、雞等單胃動物的主要益生菌,但并不是家兔腸道中的優(yōu)勢菌,其是否可以被開發(fā)為家兔的益生菌還有待研究。益生菌對動物的作用包括消化營養(yǎng)物質(zhì)、促進(jìn)腸道發(fā)育和調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系等。其中,益生菌調(diào)節(jié)微生物區(qū)系的方式之一是通過宿主腸細(xì)胞內(nèi)Toll樣受體與宿主產(chǎn)生信號交流,促進(jìn)宿主感知腸道菌群數(shù)量及結(jié)構(gòu),并通過激活先天與后天免疫進(jìn)行調(diào)控。本試驗旨在分離仔兔腸道乳酸桿菌和小腸潘氏細(xì)胞的基礎(chǔ)上,檢測乳酸桿菌對仔兔潘氏細(xì)胞分泌功能及腸道免疫的影響;并通過檢測乳酸桿菌基因組DNA對潘氏細(xì)胞TLR 9受體表達(dá)水平及炎性反應(yīng)的影響來探討其益生效應(yīng),為開發(fā)家兔益生菌提供理論依據(jù)。本研究利用選擇性培養(yǎng)基分離兔源乳酸桿菌;給7日齡新西蘭白兔灌服所分離的干酪乳桿菌8d后,檢測其對仔兔腸道發(fā)育水平以及十二指腸、空腸和回腸組織中TLR 9受體、溶菌酶及α-防御素基因表達(dá)水平的影響;以原代分離的小腸隱窩為試驗材料,用未酶切及酶切處理的干酪乳桿菌基因組DNA分別免疫刺激家兔的隱窩細(xì)胞,檢測基因組DNA對隱窩中潘氏細(xì)胞TLR 9受體、溶菌酶、α-防御素、TNF-α、INF-β和IL-6基因表達(dá)水平的影響。試驗結(jié)果如下:1)用選擇性培養(yǎng)基結(jié)合特異引物PCR及16S rDNA序列測序方法分離鑒定出兔源酸魚乳桿菌、干酪乳桿菌、短乳桿菌和屎腸球菌,其中干酪乳桿菌GC含量最高,被選作受試菌種;2)采用改進(jìn)的EDTA螯合法分離隱窩細(xì)胞,不同螯合條件下分離效果差異顯著(P0.05),本試驗選擇低溫、10 mmol/L EDTA為最佳分離條件,得到的絨毛和隱窩形態(tài)完整,基因組DNA與總RNA未發(fā)生降解。分離的隱窩富集物中溶菌酶和α-防御素基因相對表達(dá)水平極顯著高于絨毛(P0.01);3)人工哺乳仔兔灌服干酪乳桿菌菌液,可極顯著提高小腸總菌中乳酸桿菌的比例(P0.01),降低大腸桿菌的比例(P0.01);顯著提高仔兔十二指腸、空腸組織中TLR 9、溶菌酶及α-防御素基因的表達(dá)水平(P0.05),但對所檢測的回腸各基因表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響(P0.05);能極顯著提高十二指腸和空腸中脫顆粒潘氏細(xì)胞所占的比例(P0.01),但對回腸沒有影響;4)未經(jīng)酶切處理的干酪乳桿菌基因組DNA對培養(yǎng)的腸隱窩細(xì)胞并沒有顯著的免疫刺激功能(P0.05);5)腸隱窩細(xì)胞可以接受CpG 2007的免疫刺激,CpG 2007極顯著地提高隱窩TLR 9受體、溶菌酶、α-防御素、TNF-α、INF-β和IL-6基因的表達(dá)水平(P0.01);干酪乳桿菌基因組DNA經(jīng)過Sau3AI酶切之后,可對隱窩產(chǎn)生免疫刺激作用,并顯著地提高腸隱窩細(xì)胞TLR 9及α-防御素的基因表達(dá)水平(P0.05),但對溶菌酶、TNF-α、INF-β和IL-6基因的表達(dá)沒有顯著影響。綜上所述,干酪乳桿菌可以提高哺乳仔兔腸道固有免疫水平,宿主細(xì)胞可以識別來源于細(xì)菌基因組的小片段核酸序列,激活固有免疫反應(yīng)相關(guān)信號通路,提高腸道抗菌能力,為合理運(yùn)用乳酸菌提供一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：家兔 干酪乳桿菌 TLR 9受體 潘氏細(xì)胞 非甲基化CpG ODN
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S829.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-21
• 1.1 前言13
• 1.2 家兔腸道菌群結(jié)構(gòu)與功能13-15
• 1.2.1 家兔腸道菌群結(jié)構(gòu)特點(diǎn)13-14
• 1.2.2 家兔腸道菌群的功能14-15
• 1.3 乳酸桿菌15
• 1.3.1 乳酸桿菌的分類15
• 1.3.2 乳酸桿菌的免疫功能15
• 1.4 潘氏細(xì)胞15-18
• 1.4.1 潘氏細(xì)胞能合成和分泌多種抗菌物質(zhì)16-17
• 1.4.2 潘氏細(xì)胞的分泌物對腸道微生物區(qū)系的影響17
• 1.4.3 潘氏細(xì)胞的防御素對先天免疫的調(diào)節(jié)17-18
• 1.5 TOLL樣受體與非甲基化CPG DNA18-20
• 1.5.1 Toll樣受體分類及基本結(jié)構(gòu)18-19
• 1.5.2 TLR 9 與非甲基化CpG DNA19-20
• 1.6 研究內(nèi)容與技術(shù)路線20-21
• 1.6.1 主要研究內(nèi)容20
• 1.6.2 技術(shù)路線20-21
• 第二章 兔源干酪乳桿菌的分離鑒定及其對哺乳仔兔潘氏細(xì)胞分泌功能的影響21-35
• 2.1 前言21-22
• 2.2 材料與方法22-25
• 2.2.1 乳酸桿菌的分離培養(yǎng)22
• 2.2.2 菌落鑒定與保存22-23
• 2.2.3 動物試驗23
• 2.2.4 動物試驗指標(biāo)測定方法23-24
• 2.2.5 數(shù)據(jù)分析24-25
• 2.3 試驗結(jié)果25-31
• 2.3.1 分離培養(yǎng)得到乳酸菌菌株25-27
• 2.3.2 灌服干酪乳桿菌對哺乳仔兔胃、盲腸pH和腸道微生物的影響27
• 2.3.3 灌服干酪乳桿菌對哺乳仔兔腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響27-28
• 2.3.4 灌服干酪乳桿菌對哺乳仔兔腸道潘氏細(xì)胞數(shù)量的影響28-29
• 2.3.5 灌服干酪乳桿菌對腸組織TLR 9、DEFEN、LYZ基因表達(dá)的影響29-30
• 2.3.6 灌服干酪乳桿菌對腸組織炎性因子基因表達(dá)的影響30-31
• 2.4 討論31-34
• 2.4.1 乳酸桿菌的分離培養(yǎng)與鑒定31-32
• 2.4.2 干酪乳桿菌對仔兔腸道微生物、形態(tài)結(jié)構(gòu)及相關(guān)基因表達(dá)水平的影響32-34
• 2.5 小結(jié)34-35
• 第三章 低溫螯合法分離家兔小腸絨毛和隱窩及分離效果鑒定35-43
• 3.1 前言35
• 3.2 材料與方法35-37
• 3.2.1 試驗設(shè)計與螯合劑的配制35-36
• 3.2.2 小腸絨毛和隱窩的洗脫分離36
• 3.2.3 絨毛與隱窩細(xì)胞富集量、絨毛相對完整率與隱窩細(xì)胞相對活率測定36
• 3.2.4 DNA與RNA提取和電泳36
• 3.2.5 隱窩細(xì)胞的培養(yǎng)36-37
• 3.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析37
• 3.3 結(jié)果與分析37-41
• 3.3.1 絨毛和隱窩細(xì)胞團(tuán)的形態(tài)和純度37-38
• 3.3.2 各分離條件對絨毛富集率與絨毛相對完整率的影響38
• 3.3.3 各分離條件對隱窩富集率與隱窩細(xì)胞相對活率的影響38-39
• 3.3.4 絨毛和隱窩細(xì)胞DNA、總RNA保存完整39-40
• 3.3.5 絨毛和隱窩細(xì)胞團(tuán)差異表達(dá)基因檢測40
• 3.3.6 隱窩細(xì)胞在培養(yǎng)過程中相關(guān)基因表達(dá)量變化40-41
• 3.4 討論41-42
• 3.5 結(jié)論42-43
• 第四章 干酪乳桿菌基因組DNA對原代分離培養(yǎng)的兔小腸隱窩細(xì)胞分泌功能的影響43-54
• 4.1 前言43
• 4.2 試驗設(shè)計與方法43-45
• 4.2.1 試驗設(shè)計43-44
• 4.2.2 試驗方法44-45
• 4.3 試驗結(jié)果45-50
• 4.3.1 干酪乳桿菌基因組DNA對仔兔小腸隱窩細(xì)胞的影響45-47
• 4.3.2 酶切基因組序列與非甲基化CpG ODN對仔兔小腸隱窩細(xì)胞的影響47-48
• 4.3.3 酶切基因組序列與非甲基化CpG ODN對炎性因子表達(dá)的影響48-50
• 4.4 討論50-53
• 4.4.1 基因組DNA與酶切核酸序列對隱窩細(xì)胞TLR 9 受體表達(dá)的影響50-52
• 4.4.2 基因組DNA與酶切核酸序列對隱窩細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響52-53
• 4.5 小結(jié)53-54
• 第五章 總體結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)54-55
• 5.1 總體結(jié)論54
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)54
• 5.3 有待進(jìn)一步研究的問題54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 附錄62-63
• 致謝63-64
• 作者簡介64

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 滕可導(dǎo);潘氏細(xì)胞的研究[J];中國獸醫(yī)雜志;1991年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 談高;NOD2對潘氏細(xì)胞系抗菌肽和白介素-23pl9表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 唐慶娟;糖蛋白pIgR兩種新功能的發(fā)現(xiàn)研究[D];中國海洋大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 沈雪梅;兔源干酪乳桿菌對仔兔小腸潘氏細(xì)胞分泌功能的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 倪沛佩;DSS誘導(dǎo)急性UC小鼠模型病理學(xué)及腸道潘氏細(xì)胞動態(tài)變化研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

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本文編號：344465