豬鏈球菌（Streptococcus suis,SS）是一種在自然界中分布廣泛的革蘭氏陽性菌,豬、馬、牛、羊、雞、小鼠等多種動(dòng)物均可感染SS繼而發(fā)病。其中豬的易感性最高,感染后的發(fā)病豬會(huì)出現(xiàn)腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、以及敗血癥等臨床癥狀。同時(shí),人也可以感染SS繼而出現(xiàn)腦膜炎、敗血癥等臨床癥狀。由于SS引起的豬鏈球菌病的死亡率較高且該病的傳播速度較快,給養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)也嚴(yán)重危害著人類健康。因此,及時(shí)的檢測與診斷是預(yù)防豬鏈球菌病的關(guān)鍵。由于傳統(tǒng)的病原分離培養(yǎng)和生化鑒定方法很難對該病做出及時(shí)且準(zhǔn)確的診斷,并且也不太適合大量樣品的檢測。所以,建立一種能夠快速、準(zhǔn)確并且高效的檢測方法對該病的預(yù)防以及流行病學(xué)研究具有重要的意義。溶菌酶釋放蛋白（Muramidase-released protein,Mrp）是SS的一種重要的毒力標(biāo)志因子,具有良好的免疫原性。本研究對mrp基因2617³710 bp區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增,并進(jìn)一步原核表達(dá)和純化。對純化的Mrp蛋白進(jìn)行Western blot分析,結(jié)果表明該蛋白的反應(yīng)原性良好。用純化的Mrp蛋白作為包被抗原,建立了檢測SS血清抗... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

mrp基因的擴(kuò)增Fig.2-1PCRamplificationofmrpgene

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章重組Mrp蛋白的原核表達(dá)及純化132.3.4重組Mrp蛋白反應(yīng)原性分析圖2-4顯示，在誘導(dǎo)前后的陽性重組菌以及純化的目的蛋白泳道大小約為68ku處均有目的條帶出現(xiàn)，說明重組Mrp蛋白能夠與SS2陽性血清發(fā)生反應(yīng)，具有良好的反應(yīng)原性。170kuM1M170ku130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku123456130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku15ku圖2-2重組Mrp蛋白的原核表達(dá)Fig.2-2ProkaryoticexpressionofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：空載體pET-28a轉(zhuǎn)化BL21（DE3）誘導(dǎo)前；2：空載體pET-28a轉(zhuǎn)化BL21（DE3）誘導(dǎo)后；3：pET28a-mrp陽性重組菌誘導(dǎo)前；4：pET28a-mrp陽性重組菌誘導(dǎo)后；5：誘導(dǎo)陽性重組菌超聲處理后的上清；6：誘導(dǎo)陽性重組菌超聲處理后的沉淀M:marker;1:BL21(pET-28a)withoutinduction;2:BL21(pET-28a)inductionwithIPTG;3:BL21(pET28a-mrp)withoutinduction;4:BL21(pET28a-mrp)inductionwithIPTG;5:SupernatantofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantafterinductionandsonication;6:PrecipitationofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantsafterinductionandsonication圖2-3重組Mrp蛋白的純化Fig.2-3PurificationofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：純化的重組Mrp蛋白M:Marker;1:PurifiedrecombinantMrpprotein

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章重組Mrp蛋白的原核表達(dá)及純化132.3.4重組Mrp蛋白反應(yīng)原性分析圖2-4顯示，在誘導(dǎo)前后的陽性重組菌以及純化的目的蛋白泳道大小約為68ku處均有目的條帶出現(xiàn)，說明重組Mrp蛋白能夠與SS2陽性血清發(fā)生反應(yīng)，具有良好的反應(yīng)原性。170kuM1M170ku130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku123456130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku15ku圖2-2重組Mrp蛋白的原核表達(dá)Fig.2-2ProkaryoticexpressionofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：空載體pET-28a轉(zhuǎn)化BL21（DE3）誘導(dǎo)前；2：空載體pET-28a轉(zhuǎn)化BL21（DE3）誘導(dǎo)后；3：pET28a-mrp陽性重組菌誘導(dǎo)前；4：pET28a-mrp陽性重組菌誘導(dǎo)后；5：誘導(dǎo)陽性重組菌超聲處理后的上清；6：誘導(dǎo)陽性重組菌超聲處理后的沉淀M:marker;1:BL21(pET-28a)withoutinduction;2:BL21(pET-28a)inductionwithIPTG;3:BL21(pET28a-mrp)withoutinduction;4:BL21(pET28a-mrp)inductionwithIPTG;5:SupernatantofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantafterinductionandsonication;6:PrecipitationofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantsafterinductionandsonication圖2-3重組Mrp蛋白的純化Fig.2-3PurificationofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：純化的重組Mrp蛋白M:Marker;1:PurifiedrecombinantMrpprotein


本文編號：3436821