細(xì)胞蛋白 NOP53,又稱(chēng) PICT-1（protein interacting with carboxy1 terminus 1）,由膠質(zhì)瘤抑制候選基因 2（glioma tumor suppressor candidate region gene 2,GLTSCR2）編碼。在多種腫瘤細(xì)胞中,NOP53表達(dá)下調(diào)甚至消失。NOP53上存在多個(gè)核定位信號(hào);核糖體應(yīng)激時(shí),NOP53從細(xì)胞核仁易位到核質(zhì)中。NOP53能夠與多種細(xì)胞蛋白及病毒蛋白相互作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞蛋白NOP53能夠特異性去除視磺酸誘導(dǎo)基因I（retinoic acid inducible gene-I,RIG-I）K63位泛素化鏈,從而抑制RIG-I活化,阻斷Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。目的意義:本研究從細(xì)胞蛋白NOP53的表達(dá)與定位入手,研究病毒劫持NOP53以利于自身復(fù)制的機(jī)制,為揭示病毒-細(xì)胞互作機(jī)理提供重要的科學(xué)資料,同時(shí)為設(shè)計(jì)抗病毒蛋白類(lèi)廣譜抑制劑提供新思路。方法:（1）以單純皰疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus1,HSV-1）作為模式病毒,通過(guò)RT-PCR、免疫印跡、空斑實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)研究過(guò)表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：130 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１．?ＨｅＬａ細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３促進(jìn)ＨＳＶ－ｌ／Ｆ復(fù)制??在ＨｅＬａ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ｆｌａｇ空載（Ｃｔｒｌ）、Ｆｌａｇ－ＮＯＰ５３?（ＮＯＰ）或Ｆｌａｇ－Ｎ４?（Ｎ４）真核表達(dá)質(zhì)粒３６ｈ后，??

（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ?ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ?ｖｉｒｕｓ，?ＶＳＶ）復(fù)制。為了驗(yàn)證?Ｎ４?在?ＨＳＶ－１／Ｆ?復(fù)制中的作用，在?ＨｅＬａ?細(xì)??胞中轉(zhuǎn)染Ｆｌａｇ－Ｎ４，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Ｎ４也能夠上調(diào)ＨＳＶ－ＩＣＰ８?ｍＲＮＡ水平，且在病毒感染６及】２?ｈ??與對(duì)照組有顯著差異，在病毒感染２４?＾與對(duì)照組有極顯著差異（如圖２－１Ａ）。免疫印跡試驗(yàn)表??明過(guò)表達(dá)Ｎ４能夠上調(diào)ＨＳＶ－ＩＣＰ８蛋白水平（如圖２－１Ｂ）。最后，如圖２－１Ｃ，病毒感染３６ｈ，??過(guò)表達(dá)Ｎ４組病毒滴度較對(duì)照組提升３１倍；病毒感染４８?ｈ，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３組病毒滴度較對(duì)照??組提升４２倍。上述結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３羧基末端截短體Ｎ４也能夠促進(jìn)ＨＳＶ－丨／Ｆ復(fù)制，??且其作用與ＮＯＰ５３全長(zhǎng)相當(dāng)。??２．３．２基因沉默細(xì)胞蛋白ＮＯＰ５３對(duì)ＩＩＳＶ－１／Ｆ在Ｉｌｅｌａ細(xì)胞中復(fù)制的影口向??利用小干擾ＲＮＡ技術(shù)，研宄ＮＯＰ５３基因沉默對(duì)ＨＳＶ－１／Ｆ在Ｈｅｌａ細(xì)胞中復(fù)制的影響。在??ＨｅＬａ?細(xì)胞中轉(zhuǎn)染?ｓｉＮｅｇ?或?ｓｉＮＯＰ５３，?７２?ｈ?后，使用?ＨＳＶ－１／Ｆ?（０．１?ＭＯＩ）感染細(xì)胞?３、６、１２、??２４ｈ，提取細(xì)胞總ＲＮＡ，進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ，檢測(cè)病毒丨ＣＰ８ｍＲＮＡ水平。如圖２－２Ａ，可以發(fā)現(xiàn)基??因沉默ＮＯＰ５３可下調(diào)ＨＳＶ－ＩＣＰ８?ｍＲＮＡ水平且在病毒感染丨２及２４?ｌｉ與對(duì)照組有極顯著差異。??在ＨｅＬａ細(xì)胞中基因沉默ＮＯＰ５３，使用ＨＳＶ－１／Ｆ?（０．１?ＭＯＩ）感染細(xì)胞３６ｈ，提取細(xì)胞蛋白進(jìn)行??免疫印跡試驗(yàn)。如圖２－２Ｂ

ＩＦＮ－ｃｃ／ｐ［３Ｓ］）進(jìn)行試驗(yàn)。在Ｖｅｒｏ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ｆｌａｇ空載體或Ｆｌａｇ－ＮＯＰ５３真核表達(dá)質(zhì)粒，使用??ＨＳＶ－１／Ｆ?（０．１?ＭＯＩ）感染細(xì)胞３６或４８丨１。免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３能夠上調(diào)??ＨＳＶ－ＩＣＰ８蛋白水平（如圖２－３Ａ）。為了進(jìn)一步研宄過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３對(duì)ＨＳＶ－１／Ｆ在Ｖｅｒｏ細(xì)胞中復(fù)??制的影響，使用ＨＳＶ－ｌ／Ｆ?（１?ＭＯＩ）感染過(guò)表達(dá)Ｆｌａｇ空載或ｎａｇ－ＮＯＰ５３的Ｖｅｒｏ細(xì)胞，分別收??集細(xì)胞上清（Ｅｘｔｒａｃｅｌｈ丨丨ａｒ）及細(xì)胞沉淀（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）中病毒進(jìn)行空斑實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)病毒感染３６??及４８?ｈ，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３組上清中病毒滴度較對(duì)照組分別提升１４．７倍及１２．６倍（如圖２－３Ｂ）。??病毒感染３６及４８?ｈ，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３組細(xì)胞沉淀中病毒滴度較對(duì)照組分別提升丨４．３倍及］３．６??倍（如圖２－３Ｃ）。丨：述結(jié)果表明，在Ｖｅｒｏ細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)ＮＯＰ５３依然能夠促進(jìn)ＨＳＶ－１／Ｆ復(fù)制。??另外，在Ｖｅｒｏ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ｆ］ａｇ－Ｎ４進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Ｎ４能夠上調(diào)ＨＳＶ－ＴＣＰ８??蛋白水平（如圖２－３Ａ）。病毒感染３６及４８?ｈ，過(guò)表達(dá)Ｎ４組上清中病毒滴度較對(duì)照組分別提升??１０．６倍及丨２．６倍（如圖２－３Ｂ）。病毒感染３６及４８?ｈ，過(guò)表達(dá)Ｎ４組細(xì)胞沉淀中病毒滴度較對(duì)照??組分別提升８．８倍及８．９倍（如圖２－３Ｃ）。上述結(jié)果表明

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Effects of Nigella sativa on outcome of hepatitis C in Egypt[J]. Eman Mahmoud Fathy Barakat,Lamia Mohamed El Wakeel,Radwa Samir Hagag.  World Journal of Gastroenterology. 2013(16)
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博士論文
[1]GLTSCR2負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素及抗病毒應(yīng)答的分子機(jī)制[D]. 王鵬.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]核仁蛋白PICT-1在核糖體應(yīng)激下對(duì)MDM2-P53信號(hào)通路及腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其分子機(jī)制[D]. 宋瓏.中南大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3434530