TLR4（Toll-like receptor 4）作為一種重要的模式識別受體（pattern recognition receptors,PRRs）,在介導(dǎo)脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮主導(dǎo)作用,并參與介導(dǎo)由LPS誘導(dǎo)的一系列前炎性細胞因子的合成與釋放,進而引發(fā)過度炎癥反應(yīng)（Goldammer et al.,2004）,在G^-致病機理中有至關(guān)重要的作用�，F(xiàn)已證實,在人和鼠體內(nèi)TLR4都是LPS最重要的模式識別受體,作為一種跨膜信號受體,TLR4可將LPS刺激信號直接傳入細胞內(nèi),在介導(dǎo)革蘭氏陰性細菌及LPS的宿主反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用（Hashimoto et al.,2004）。研究在LPS介導(dǎo)下TLR4基因與胞內(nèi)炎癥因子的變化情況是闡明TLR4基因在抗革蘭氏陰性細菌感染的基本途徑。本研究選擇貴州黔北麻羊為試驗對象,根據(jù)Gene Bank中山羊TLR4基因序列對其三個外顯子分別設(shè)計引物,采用PCR結(jié)合直接測序法對TLR4三個外顯子SNPs進行篩選;通過克隆TLR4基因CDS全長,構(gòu)建重組真核表達載體pEGFP-N1-TL... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因組DNA提取結(jié)果

圖 2.2 黔北麻羊 TLR4 基因各外顯子 PCR 擴增結(jié)果Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Go圖可知，各擴增片段與預(yù)期片段大小相符，條帶明亮單一，無拖異性條帶，可用于下一步試驗。黔北麻羊 DNA 池篩選 TLR4 基因多態(tài)性照上述方法，將所提取 DNA 樣本進行混池后，以 DNA 混合池為性擴增，取條帶明亮無雜帶的 PCR 產(chǎn)物送至上海生工生物有限公運用 DNAstar 軟件中 SeqMan 程序?qū)y序結(jié)果與 NCBI 上所提交的分析，初步確定其變異位點，經(jīng)對比分析，TLR4 基因 3 個外顯子 SNP 位點（見圖 2.3），其中 2 個 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1Exon3，以TLR4基因第一外顯子第一位堿基為+1，則其SNPs分布為C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu變。

Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Goat由圖可知，各擴增片段與預(yù)期片段大小相符，條帶明亮單一，無拖尾現(xiàn)象，無非特異性條帶，可用于下一步試驗。2.4.3 黔北麻羊 DNA 池篩選 TLR4 基因多態(tài)性按照上述方法，將所提取 DNA 樣本進行混池后，以 DNA 混合池為模版進行特異性擴增，取條帶明亮無雜帶的 PCR 產(chǎn)物送至上海生工生物有限公司進行測序。運用 DNAstar 軟件中 SeqMan 程序?qū)y序結(jié)果與 NCBI 上所提交的序列進行對比分析，初步確定其變異位點，經(jīng)對比分析，TLR4 基因 3 個外顯子中共發(fā)現(xiàn) 3 個 SNP 位點（見圖 2.3），其中 2 個 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1 個位于TLR4 Exon3，以TLR4基因第一外顯子第一位堿基為+1，則其SNPs分布為Intron1A+212C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu-val）為錯義突變。

【參考文獻】：
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本文編號：3434263