TLR4（Toll-like receptor 4）作為一種重要的模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors,PRRs）,在介導(dǎo)脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮主導(dǎo)作用,并參與介導(dǎo)由LPS誘導(dǎo)的一系列前炎性細(xì)胞因子的合成與釋放,進(jìn)而引發(fā)過(guò)度炎癥反應(yīng)（Goldammer et al.,2004）,在G^-致病機(jī)理中有至關(guān)重要的作用。現(xiàn)已證實(shí),在人和鼠體內(nèi)TLR4都是LPS最重要的模式識(shí)別受體,作為一種跨膜信號(hào)受體,TLR4可將LPS刺激信號(hào)直接傳入細(xì)胞內(nèi),在介導(dǎo)革蘭氏陰性細(xì)菌及LPS的宿主反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用（Hashimoto et al.,2004）。研究在LPS介導(dǎo)下TLR4基因與胞內(nèi)炎癥因子的變化情況是闡明TLR4基因在抗革蘭氏陰性細(xì)菌感染的基本途徑。本研究選擇貴州黔北麻羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象,根據(jù)Gene Bank中山羊TLR4基因序列對(duì)其三個(gè)外顯子分別設(shè)計(jì)引物,采用PCR結(jié)合直接測(cè)序法對(duì)TLR4三個(gè)外顯子SNPs進(jìn)行篩選;通過(guò)克隆TLR4基因CDS全長(zhǎng),構(gòu)建重組真核表達(dá)載體pEGFP-N1-TL... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基因組DNA提取結(jié)果

圖 2.2 黔北麻羊 TLR4 基因各外顯子 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Go圖可知，各擴(kuò)增片段與預(yù)期片段大小相符，條帶明亮單一，無(wú)拖異性條帶，可用于下一步試驗(yàn)。黔北麻羊 DNA 池篩選 TLR4 基因多態(tài)性照上述方法，將所提取 DNA 樣本進(jìn)行混池后，以 DNA 混合池為性擴(kuò)增，取條帶明亮無(wú)雜帶的 PCR 產(chǎn)物送至上海生工生物有限公運(yùn)用 DNAstar 軟件中 SeqMan 程序?qū)y(cè)序結(jié)果與 NCBI 上所提交的分析，初步確定其變異位點(diǎn)，經(jīng)對(duì)比分析，TLR4 基因 3 個(gè)外顯子 SNP 位點(diǎn)（見(jiàn)圖 2.3），其中 2 個(gè) SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1Exon3，以TLR4基因第一外顯子第一位堿基為+1，則其SNPs分布為C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu變。

Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Goat由圖可知，各擴(kuò)增片段與預(yù)期片段大小相符，條帶明亮單一，無(wú)拖尾現(xiàn)象，無(wú)非特異性條帶，可用于下一步試驗(yàn)。2.4.3 黔北麻羊 DNA 池篩選 TLR4 基因多態(tài)性按照上述方法，將所提取 DNA 樣本進(jìn)行混池后，以 DNA 混合池為模版進(jìn)行特異性擴(kuò)增，取條帶明亮無(wú)雜帶的 PCR 產(chǎn)物送至上海生工生物有限公司進(jìn)行測(cè)序。運(yùn)用 DNAstar 軟件中 SeqMan 程序?qū)y(cè)序結(jié)果與 NCBI 上所提交的序列進(jìn)行對(duì)比分析，初步確定其變異位點(diǎn)，經(jīng)對(duì)比分析，TLR4 基因 3 個(gè)外顯子中共發(fā)現(xiàn) 3 個(gè) SNP 位點(diǎn)（見(jiàn)圖 2.3），其中 2 個(gè) SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1 個(gè)位于TLR4 Exon3，以TLR4基因第一外顯子第一位堿基為+1，則其SNPs分布為Intron1A+212C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu-val）為錯(cuò)義突變。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3434263