毛囊是皮膚的附屬器官，由20多種細胞組成，主要分為上皮細胞和真皮細胞兩類，上皮細胞和真皮細胞的相互作用是誘導毛囊形成和周期性變化的主要原因。絨山羊的毛囊分為初級毛囊和次級毛囊，其產(chǎn)物分別是粗毛和細絨。粗毛和細絨纖維直徑差異極大，且用途及經(jīng)濟價值顯著不同。初級毛囊的周期性變化不明顯，而次級毛囊在一年中經(jīng)歷生長期、退行期和休止期三個階段，具有顯著的周期性、時序性。miRNA是一種大小為19-25nt的非編碼核苷酸單鏈小分子RNA，通過與靶基因結合位點的特異性結合，抑制靶基因翻譯或降解靶mRNA來發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明miRNA參與機體的各種調(diào)節(jié)途徑，包括胚胎發(fā)育、器官形成、細胞分化增殖和凋亡、細胞周期的轉換、肌肉和脂肪代謝等。本研究利用高通量測序、細胞培養(yǎng)、細胞轉染、基因克隆及基因表達分析等實驗技術結合生物信息學分析，對陜北白絨山羊次級毛囊周期性變化相關的miRNA進行鑒定和差異性分析，繼而對表達差異性顯著的miR-125b進行了初步的功能研究，取得以下主要結果：1.構建了絨山羊次級毛囊生長期、退行期和休止期皮膚組織的小RNA文庫，經(jīng)Solexa測序后得到純凈讀數(shù)分別為15,997,... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    第一章 毛囊周期性變化及其在絨山羊上的研究進展
        1.1 毛囊周期性變化
        1.2 毛囊周期性變化的分子調(diào)控
        1.3 絨山羊毛囊周期性變化的研究
    第二章 miRNA 的特征及在絨山羊上的研究進展
        2.1 miRNA 生物合成
        2.2 家畜中 miRNA 的研究
        2.3 miRNA 在皮膚和毛囊發(fā)育中的研究
        2.4 本研究的目的意義
試驗研究
    第三章 絨山羊次級毛囊周期性變化時期皮膚小 RNA 文庫構建及序列分析
        3.1 材料與方法
            3.1.1 所用試劑與儀器
            3.1.2 試驗動物及皮膚組織的采集
            3.1.3 總 RNA 的提取
            3.1.4 小 RNA 文庫的構建
            3.1.5 高通量測序
            3.1.6 小 RNA 序列分析
        3.2 結果與分析
            3.2.1 總 RNA 樣品質量檢測
            3.2.2 小 RNA 的生物信息學分析
        3.3 討論
            3.3.1 miRNA 的鑒定方法
            3.3.2 小 RNA 測序分析
        3.4 小結
    第四章 絨山羊次級毛囊周期性變化相關 miRNA 的差異表達及其靶基因功能分析
        4.1 材料與方法
            4.1.1 所用試劑與儀器
            4.1.2 皮膚組織的采集
            4.1.3 總 RNA 的提取
            4.1.4 保守 miRNA 的差異分析
            4.1.5 新 miRNA 的預測
            4.1.6 miRNA 的堿基編輯
            4.1.7 miRNA 靶基因的預測及功能分析
            4.1.8 實時定量 PCR
        4.2 結果與分析
            4.2.1 保守 miRNA 的差異分析
            4.2.2 新 miRNA 的預測
            4.2.3 miRNA 的堿基編輯
            4.2.4 miRNA 靶基因的預測及功能分析
            4.2.5 miRNA 實時定量 PCR 分析
        4.3 討論
            4.3.1 山羊 miRNA 的鑒定
            4.3.2 miRNA 差異表達分析
            4.3.3 miRNA 預測靶基因的功能分析
        4.4 小結
    第五章 miR-125b 靶基因預測與鑒定
        5.1 材料與方法
            5.1.1 所用試劑與儀器
            5.1.2 miR-125b 靶基因預測
            5.1.3 miR-125b 靶位點的擴增
            5.1.4 序列比對
            5.1.5 雙熒光素酶載體的構建
            5.1.6 293T 細胞的培養(yǎng)
            5.1.7 雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)
        5.2 結果與分析
            5.2.1 miR-125b 靶基因預測
            5.2.2 miR-125b 靶位點的擴增
            5.2.3 雙熒光素酶載體構建
            5.2.4 細胞轉染
            5.2.5 雙熒光素酶報告基因檢測
        5.3 討論
            5.3.1 miR-125b 靶基因的預測
            5.3.2 miR-125b 靶基因的驗證
        5.4 小結
    第六章 miR-125b 在絨山羊毛乳頭細胞中的功能研究
        6.1 材料與方法
            6.1.1 所用試劑與儀器
            6.1.2 絨山羊毛乳頭細胞的培養(yǎng)
            6.1.3 絨山羊次級毛囊毛乳頭細胞的鑒定
            6.1.4 miR-125b 組織表達譜的構建
            6.1.5 腺病毒載體構建及包裝
            6.1.6 腺病毒滴度測定
            6.1.7 重組腺病毒的轉染與表達檢測
        6.2 結果與分析
            6.2.1 絨山羊毛乳頭細胞體外培養(yǎng)
            6.2.2 絨山羊次級毛囊毛乳頭細胞的鑒定
            6.2.3 miR-125b 組織表達譜
            6.2.4 miR-125b 腺病毒載體的構建
            6.2.5 腺病毒包裝及病毒滴度測定
            6.2.6 腺病毒感染毛乳頭細胞最佳感染濃度的測定
            6.2.7 腺病毒感染毛乳頭細胞中 miR-125b 表達量的檢測
            6.2.8 病毒感染毛乳頭細胞后毛囊周期性變化相關基因的檢測
        6.3 討論
            6.3.1 絨山羊次級毛囊毛乳頭細胞的培養(yǎng)與鑒定
            6.3.2 病毒感染毛乳頭細胞后毛囊周期性變化相關基因的檢測
        6.4 小結
結論
創(chuàng)新點
還需進一步深入研究的問題
參考文獻
附錄
縮略詞表
致謝
作者簡介及博士期間所發(fā)表的論文



本文編號：3431651