MicroRNAs （mirRNA）是一類長約22-25nt的非編碼的單鏈RNA分子,廣泛存在于植物,動物和人類的細(xì)胞中,通過堿基配對的方式結(jié)合到靶mRNA的3’非編碼區(qū)（3’UTR）,從而抑制其翻譯。與肌肉發(fā)育相關(guān)的mirRNA有很多。其中miR-133b為肌肉特異性mirRNA,是myomiRs家族成員。目前關(guān)于1niR-133b在牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的研究較少。為了探討miR-133b對牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響,本實(shí)驗以原代培養(yǎng)的牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為實(shí)驗材料,通過Real Time PCR檢測正常培養(yǎng)的牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在增殖階段miR-133b的表達(dá)量。構(gòu)建了miR-133b真核過表達(dá)載體pcDNA3.1（+）-miR-133b,轉(zhuǎn)染后采用EdU試劑盒檢測miR-133b對牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響,利用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-133b可能的靶基因,雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞C靶基因,轉(zhuǎn)染miR-133b的真核過表達(dá)載體后,Real Time PCR和Western Blot檢測SP1基因表達(dá)變化。結(jié)果表明：使用膠原酶XI與胰蛋白酶相結(jié)合的方法,經(jīng)過差速貼壁成功分離了原代牛骨骼肌衛(wèi)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨豁肌發(fā)育關(guān)鍵階段示意圖

肌非特異性microRNA調(diào)節(jié)骨豁肌細(xì)胞增殖、分化網(wǎng)絡(luò)圖

細(xì)胞生長圖片


本文編號：3431619