牛肉做為世界消費(fèi)量第二的肉類食品得到越來(lái)越多消費(fèi)者的青睞。培育出肉質(zhì)好、營(yíng)養(yǎng)高的肉牛品種，是育種工作者努力的方向。目前，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是肉牛改良的重要手段之一，尋找安全、高效的轉(zhuǎn)基因載體及改良作用明顯的目的基因成為轉(zhuǎn)基因研究的重要課題。PiggyBac（PB）轉(zhuǎn)座子在轉(zhuǎn)基因昆蟲(chóng)、小鼠等的研究中充分體現(xiàn)了其優(yōu)勢(shì)，但在轉(zhuǎn)基因牛中的研究還不多。脂肪酸結(jié)合蛋白3（Fatty acid binding protein3，F(xiàn)ABP3）是影響肌內(nèi)脂肪（Intramuscular fat，IMF）沉積的候選基因，fat-1基因編碼的ω-3脂肪酸脫氫酶能促進(jìn)ω-3多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fattyacids，PUFAs）的合成，對(duì)人類健康有重要作用。本研究探索了PB轉(zhuǎn)座子在�；蚪M中的轉(zhuǎn)座特點(diǎn)，并在小鼠水平對(duì)FABP3和Bfat-1（牛源化fat-1）基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究，為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因牛探索新方法、尋找新基因提供了理論依據(jù)。本研究共得到如下結(jié)果：1．構(gòu)建了PB[CMV-EGFP]、pcDNA-PBase二元轉(zhuǎn)座體系，利用細(xì)胞核電轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染牛耳組織成纖維細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)座酶（PBase）... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：111 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

RNAi的作用機(jī)制Fig.1.1ThemechanismofRNAi

啟動(dòng)FokⅠ的“分子剪刀”活性，在結(jié)合位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈斷裂，繼而啟動(dòng)細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制。細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制包括兩種類型：一是存在供體模板時(shí)，啟動(dòng)同源重組修復(fù)途徑，將外源基因定點(diǎn)插入到靶基因內(nèi)，或置換靶基因的特定序列，實(shí)現(xiàn)基因的敲入（圖1.2A）；二是不存在供體模板時(shí)，啟動(dòng)非同源重組末端連接修復(fù)途徑，在基因內(nèi)引入了堿基突變，導(dǎo)致基因功能的缺失，實(shí)現(xiàn)基因的敲除（圖1.2B）。圖1.2 鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因打靶Fig. 1.2 Zinc-finger nucleases mediated gene targeting利用ZFN技術(shù)進(jìn)行基因的定點(diǎn)敲除，已經(jīng)在果蠅(Bibikova et al., 2002)、斑馬魚(yú)(Doyon et al.,2008)、大鼠(Geurts et al., 2009)及小鼠(Carbery et al., 2010)等試驗(yàn)動(dòng)物上獲得了成功，廣泛應(yīng)用于

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述6采用“復(fù)制-粘貼”機(jī)制進(jìn)行轉(zhuǎn)座（圖1.4A），即原始的轉(zhuǎn)座子DNA不變，轉(zhuǎn)錄出RNA作為中間體，RNA在轉(zhuǎn)座子編碼的逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下逆轉(zhuǎn)錄成DNA，并在轉(zhuǎn)座子編碼的整合酶的作用下插入到基因組中。DNA型轉(zhuǎn)座子使用“剪切-粘貼”的轉(zhuǎn)座機(jī)制(圖1.4B)，即在轉(zhuǎn)座酶的作用下，轉(zhuǎn)座子從原位置切除并整合到基因組中新的位置（劉琳等，2011）。圖1.4 轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座機(jī)制a：逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子使用 復(fù)制-粘貼 的轉(zhuǎn)座機(jī)制。b：DNA轉(zhuǎn)座子使用 剪切-粘貼 的轉(zhuǎn)座機(jī)制。Fig.1.4 Transposition mechanism of different transposonsa: The copy-paste transposition mechanism of retrot ransposons. b: The copy-paste transposition mechanism of DNA transposon.自 McClintock (1950)在玉米中發(fā)現(xiàn)第一個(gè)轉(zhuǎn)座子以來(lái)，轉(zhuǎn)座子被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于大多數(shù)的微生物、動(dòng)物和植物的基因組中


本文編號(hào)：3431549