洛克沙胂（Rox）是在世界范圍內(nèi)廣泛使用的一種含砷飼料添加劑,對促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展起了很大作用。Rox促進(jìn)動(dòng)物生長的機(jī)制至今并不完全清楚,可能與增強(qiáng)細(xì)胞生長、免疫及能量代謝相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān),也可能與促進(jìn)血管生長、增加血管通透性有關(guān)。目前國內(nèi)外對這方面的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)室在體內(nèi)體外對Rox促血管作用進(jìn)行了相關(guān)研究,在此基礎(chǔ)上,本文通過阻斷VEGF及其受體KDR/FLT-1,經(jīng)MTT法、細(xì)胞免疫熒光、Elisa法、Western blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR,研究Rox促內(nèi)皮細(xì)胞生長作用中VEGF/VEGFR的作用,增加對Rox促血管生成作用VEGF機(jī)制的認(rèn)識(shí),為Rox作為畜禽飼料添加劑使用的安全性評價(jià),以及為有機(jī)胂殘留潛在的促（致）癌風(fēng)險(xiǎn)評估提供理論依據(jù)。大鼠內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)不同處理12、24、36、48h后,MTT法檢測細(xì)胞活力；Elisa法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中的VEGF水平；細(xì)胞免疫熒光、Western blot及定量PCR檢測細(xì)胞中VEGF、 VEGFR （KDR/FLT-1）的表達(dá)。不同處理劑量組共11組,分別為PBS陰性對照組（陰）、10ng/mL VEGF陽性對照組（陽）、Rox0.1... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

VEGF基因及不同的轉(zhuǎn)錄體(引自httpa/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15602010)

VEGFR-2 (KDR)EGFR-2位于染色體4ql2，全長編碼1356個(gè)氨基酸，胞外區(qū)含766個(gè)氨基酸，胞內(nèi)565個(gè)氨基酸，由激酶功能區(qū)、68個(gè)氨基酸組成的酷氨酸激酶插入?yún)^(qū)及C端組成�？�25個(gè)氨基酸[22]，總分子量230 kD。在VEGF誘導(dǎo)的促有絲分裂，血管新生和血管的作用中，VEGFR-2是最重要的受體。VEGFR-2蛋白激酶的核心區(qū)存在兩裂片樣結(jié)構(gòu)，而蛋白激酶的活性巾心又剛好位于這兩個(gè)裂片之間，由這兩個(gè)裂片的殘基共[23]�，F(xiàn)在己經(jīng)發(fā)現(xiàn)的VEGFR-2的磷酸化位點(diǎn)有第951、1054、1059、1175位酷氨EGFR-2在脾、腎、心、肺組織中表達(dá)水平較高，主要分布在血管和淋巴內(nèi)皮細(xì)胞中。胞促有絲分裂原VEGF-A與VEGFR-2結(jié)合，將細(xì)胞外信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)激活信號(hào)轉(zhuǎn)，刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加血管通透性、促進(jìn)血管新生。前巳經(jīng)證實(shí)了 VEGFR-2的激活負(fù)調(diào)節(jié)與Src丨nl源的SHP1及SHP2的酪氨酸激酶脫[24二5]。通過蛋白酶體途徑的快速降解以及受體的內(nèi)陷與溶酶體內(nèi)降解，導(dǎo)致受體酷酶的激活過程下調(diào)。所以VEGFR-2快速內(nèi)吞及失活對VEGF梯度的精確及局部反

揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文 ^VEGFR-2信號(hào)傳遞主要是通過PLCy-PKC-Raf-MEK-MAPK信號(hào)通路，Tyr 1175自身憐酸化產(chǎn)生VEGFR相關(guān)的結(jié)合位點(diǎn)與血清肌酸激酶（Sck)、PLCyl結(jié)合的位點(diǎn)與PLCyl結(jié)合激活蛋白激酶C，從而激活Ras。而活化的PLCy,能水解4，5- 二磷酸憐脂酰肌醇（PIP2)生成二酷甘油（DAG)和1,4,5-三憐酸肌醇（IP3)。1P3可增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度，而DAG是PKC的生理激活劑。通過誘導(dǎo)細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶Erk途徑(p42/44胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶MAPK)的激活。ERK能轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，在細(xì)胞核內(nèi)磷酸化和活化轉(zhuǎn)錄因子（包括c-Jun和三元復(fù)合因子）從而誘導(dǎo)c-fos基因的轉(zhuǎn)錄VEGFR-2還可激活憐脂酷肌醇（PI3K),導(dǎo)致脂質(zhì)磷脂醜肌醇（3，4,5)-P3的增加，從而激活蛋白激酶B (AKT/PKB),內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOs),小GTP結(jié)合蛋白R(shí)ac。Akt/PKB抑制Bcl-2相關(guān)的凋亡啟動(dòng)子和caspase-9兩種凋亡蛋白，從而保證細(xì)胞的存活[35]。內(nèi)皮型一氧化氮合酶生成的一氧化氮，增加血管通透性和細(xì)胞遷移，是通過Rac進(jìn)一步促進(jìn)的[36_37]。VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞骨架重塑、細(xì)胞遷移是通過VEGFR-2與P38MAPK、HSP27激酶結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的[38]。VEGFR2

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表達(dá)研究[D]. 崔衛(wèi)波.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[2]內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及洛克沙胂對內(nèi)皮細(xì)胞影響的初步研究[D]. 劉學(xué).揚(yáng)州大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3421093